本文關(guān)鍵詞：重組抗狂犬病病毒抗體在HEK293 EBNA1細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)優(yōu)化

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【摘要】：目的:優(yōu)化重組抗體在懸浮無血清培養(yǎng)的HEK293 EBNA1瞬時(shí)表達(dá),提高重組抗體表達(dá)量。方法:將HEK293 EBNA1細(xì)胞適應(yīng)于無血清懸浮培養(yǎng),篩選適宜的無血清培養(yǎng)基。使用PEI轉(zhuǎn)染質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞,瞬時(shí)表達(dá)重組抗體;使用Modde軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DOE),優(yōu)化轉(zhuǎn)染質(zhì)粒量、輕重鏈比例、PEI量等影響瞬時(shí)表達(dá)的條件。培養(yǎng)上清經(jīng)親和純化,獲得目標(biāo)抗體,用快速免疫熒光灶抑制試驗(yàn)(RFFIT)測定抗體活性,用BCA法測定純化抗體濃度。結(jié)果:293SFMII為適宜的HEK293 EBNA1細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)基。對抗體表達(dá)影響最大的因素是輕重鏈比例(P=0.00000),其次為質(zhì)粒濃度(P=0.00086),最后為PEI(P=0.00257)。優(yōu)化的轉(zhuǎn)染條件為:質(zhì)粒用量0.61μg/106細(xì)胞,輕重鏈比例2:1,PEI 2.67μg/106細(xì)胞,優(yōu)化后抗體表達(dá)量有顯著提高(P=0.007)。結(jié)論:通過DOE優(yōu)化獲得了重組抗狂犬病病毒抗體的高水平表達(dá),抗體表達(dá)量提高了至少50倍。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【基金】：甘肅省青年科技基金計(jì)劃(145RJYA290)
【分類號】：R392
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):Q812 Document code:AArticle ID:1673-6273(2015)33-6439-05前言對大部分抗體分子而言,其重鏈糖基化對其功能具有非常重要的影響,因此,抗體分子的功能驗(yàn)證一般需要使用哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)表達(dá)進(jìn)行。瞬時(shí)基因表達(dá)(Transient gene expres-si

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本文編號：1170693