本文關鍵詞：豬細胞周期蛋白依賴性激酶2多克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：為研究豬細胞周期蛋白依賴性激酶2(pCDK2)的生物學功能,本試驗構建重組原核表達載體pET28apCdk2,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)受體菌,用IPTG誘導重組蛋白(rpCDK2)表達并進行SDS-PAGE和Western blotting鑒定,蛋白經(jīng)純化及與弗氏佐劑乳化后免疫家兔制備多克隆抗體。分別用Western blotting和免疫過氧化物酶單層細胞染色法(IPMA)檢測抗體的免疫活性。結果顯示,成功表達了rpCDK2蛋白,該蛋白以可溶性和包涵體兩種形式存在,可溶性rpCDK2蛋白分子質(zhì)量約為38ku,包涵體rpCDK2蛋白在38~43ku間有3種不同分子質(zhì)量形式;IPMA檢測結果顯示,所制備的pCDK2蛋白多克隆抗體與豬腎細胞(PK-15)和豬睪丸細胞(ST)免疫染色呈特異性反應,且Western blotting分析顯示,多克隆抗體與這兩種細胞的總蛋白反應出現(xiàn)4條特異性條帶(分子質(zhì)量在34~50ku之間),可能跟pCDK2的多種磷酸化形式有關。本試驗利用原核表達系統(tǒng)成功制備了rpCDK2蛋白,并制備了免疫活性和特異性良好的pCDK2蛋白多克隆抗體,為該蛋白生物學功能及相關疾病研究提供了基礎材料。
【作者單位】： 南陽師范學院南陽市獸醫(yī)生物工程技術研究中心河南省伏牛山昆蟲生物學重點實驗室昆蟲生物反應器河南省工程實驗室;
【基金】：國家自然基金青年基金(31101837) 河南省重點科技攻關項目(142102110101) 南陽師范學院引進人才專項項目(70640)
【分類號】：R392
【正文快照】： 細胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin dependentkinases,CDKs)是一類在細胞周期調(diào)控中起重要作用的蛋白激酶,常與周期蛋白以復合物(Cyclin/CDKs)的形式發(fā)揮調(diào)控作用。其中,CDK2與Cyc-lin E和Cyclin A相互作用,在細胞周期調(diào)控、細胞DNA合成和修復過程中扮演著關鍵角色[1-2]。研究結

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本文編號：1162357