本文關(guān)鍵詞：IL-17及JAK抑制劑AG490對泡沫化巨噬細胞ABCA1表達的影響

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【摘要】：目的: 白介素-17（Interleukin-17，IL-17）是新近發(fā)現(xiàn)的一個促炎癥細胞因子，具有致動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）的作用，酪氨酸蛋白激酶-信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活因子（Janus kinase signal transducers and activators of transcription，JAKs-STATs）是其發(fā)揮作用的途徑之一。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ATP-binding cassette transporter，ABCA1）在細胞中的主要作用為促進細胞內(nèi)膽固醇運輸和減少細胞內(nèi)的炎癥因子。雙面神激酶（Janus kinase，JAK）抑制劑2-氰基-3-(3，4-二羥基苯基)-N-(苯甲基)-2-丙烯酰胺(2-cyano-3-(3，4-dihydroxyphenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide，AG490)為JAK抑制劑，能阻斷JAKs-STATs信號通路。本文通過觀察IL-17及AG490對泡沫化巨噬細胞ABCA1mRNA及蛋白的表達情況，探討IL-17及AG490對泡沫化巨噬細胞的作用。 方法: 1.檢測IL-17對泡沫化巨噬細胞ABCA1mRNA及蛋白的表達情況：THP-單核（Thp-1monocyte，THP-1）細胞經(jīng)佛波酯（phorbol12-myristate13-acetate，PMA）（100nmol/L）誘導24h-48h形成巨噬細胞，經(jīng)氧化低密度脂蛋白（oxidizedlow density lipoprotein，ox-LDL）(50μg/mL)泡沫化后建立巨噬細胞泡沫化模型，油紅O乙醇染液鑒定泡沫化巨噬細胞。上述泡沫化巨噬細胞中分別加入IL-17（100ng/mL），不同時間點（0h，6h，12h，24h）收取細胞，分別提取RNA及蛋白，RT-PCR、Western blotting檢測ABCA1mRNA及蛋白的表達。上述泡沫化巨噬細胞中加入IL-17(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），24h后收取細胞，分別提取RNA及蛋白，RT-PCR、Western blotting檢測ABCA1mRNA及蛋白的表達。 2.檢測JAK抑制劑AG490與IL-17對泡沫化巨噬細胞ABCA1mRNA及蛋白的表達情況: IL-17（100ng/mL）及AG490（0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L）共處理泡沫化巨噬細胞24h后收取細胞，分別提取RNA及蛋白，RT-PCR、Western blotting檢測ABCA1mRNA及蛋白的表達。 結(jié)果: 1.THP-1細胞呈圓形，，懸浮生長，經(jīng)PMA（100nmol/L）誘導24h-48h后成為梭形的貼壁巨噬細胞，并伸出偽足，ox-LDL(50μg/mL)誘導巨噬細胞形成泡沫化巨噬細胞，其特征為脂質(zhì)成份增多，聚集成滴，能被油紅O乙醇染液染成紅色。 2.隨著泡沫化巨噬細胞中IL-17濃度的增加（0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），RT-PCR、Western blotting檢測ABCA1mRNA及蛋白的表達隨著IL-17濃度增加而減少（p＜0.05），隨著泡沫化巨噬細胞中IL-17作用時間的延長（0h、6h、12h、24h），RT-PCR、Western blotting檢測ABCA1mRNA及蛋白的表達隨IL-17作用時間增加而減少（p＜0.05）。 3.JAK抑制劑AG490與IL-17（100ng/mL）共同處理泡沫化巨噬細胞后，RT-PCR、Western blotting檢測ABCA1mRNA及蛋白的表達隨著泡沫化巨噬細胞中AG490濃度增加（0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L）而增加（p＜0.05）。 結(jié)論: 1.通過ox-LDL誘導巨噬細胞能夠成功構(gòu)建巨噬細胞泡沫化模型。 2.IL-17能夠減少泡沫化巨噬細胞ABCA1mRAN及蛋白的表達，并呈時間和濃度依賴性。 3.AG490能夠減弱IL-17對泡沫化巨噬細胞ABCA1mRNA及蛋白的表達，提示IL-17可能通過JAKs-STATs信號通路影響ABCA1表達。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R363

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本文編號：1161215