本文關(guān)鍵詞：D型沙眼衣原體質(zhì)粒蛋白pgp3的克隆、表達(dá)、鑒定及其免疫原性初探

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【摘要】：[目的]獲得D型沙眼衣原體質(zhì)粒蛋白pgp3基因及其蛋白,制備鼠源性多克隆抗體,鑒定蛋白免疫原性。 [方法]聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增目的基因,將其插入pZeroBack載體,對(duì)pZeroBack/pgp3和原核表達(dá)載體pGEX-6p-1進(jìn)行酶切后連接,產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌DH5a,提取質(zhì)粒進(jìn)行酶切、測(cè)序、PCR鑒定。再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌BL21并經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),Western印跡鑒定目的蛋白,GST磁珠(GST MagBeads)純化pgp3-谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶融合蛋白(pgp3-GST融合蛋白)。用純化后的蛋白免疫Balb/c小鼠,制備多克隆抗體,Western印跡、細(xì)胞免疫熒光鑒定抗體的特異性,間接ELISA法測(cè)定抗體滴度。 [結(jié)果]克隆目的基因測(cè)序長(zhǎng)度為795bp,序列與GeneBank中一致,Western印跡顯示目的蛋白分子量約為54000,并得到純化的蛋白。獲得鼠源性多克隆抗體,經(jīng)Western印跡和細(xì)胞免疫熒光鑒定抗體可特異性結(jié)合pgp3蛋白,ELISA測(cè)定所得抗體滴度為1：819200。 [結(jié)論]成功表達(dá)并純化具有強(qiáng)免疫原性的pgp3-GST融合蛋白,并且成功制備具有高效價(jià)、高特異性的抗pgp3多克隆抗體,為沙眼衣原體的致病機(jī)理和臨床診斷治療的相關(guān)研究提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 閆玲,馮樹異,周勁松,王雙元;應(yīng)用McCoy細(xì)胞及Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)沙眼衣原體D型株[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1997年01期

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3 馬t焥，

本文編號(hào)：1160860