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  本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌重組蛋白LytA體外抗菌效應(yīng)探討

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【摘要】：目的構(gòu)建肺炎鏈球菌(ATCC49619)自溶素lytA基因的原核表達(dá)載體,并在大腸埃希菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá),獲取LytA重組蛋白(rLytA),初步探討其體外抗菌效應(yīng)。方法根據(jù)GenBank中的肺炎鏈球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)設(shè)計(jì)合成特異性引物,采用PCR技術(shù)從肺炎鏈球菌ATCC49619標(biāo)準(zhǔn)株基因組中擴(kuò)增lytA基因序列,分別構(gòu)建克隆載體PGM-T/lytA和表達(dá)載體pET32a(+)/lytA,將pET32a(+)/lytA轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞E.coli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后用透析袋等電點(diǎn)洗脫技術(shù)純化目的蛋白rLytA;采用微量肉湯稀釋法測(cè)定rLytA和青霉素G對(duì)肺炎鏈球菌及其青霉素G耐藥株的最低抑菌濃度(MIC),動(dòng)態(tài)測(cè)定肺炎鏈球菌及其耐藥株對(duì)rLytA和青霉素G的藥物敏感性,評(píng)價(jià)rLytA的體外抗菌活性。結(jié)果成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET32a(+)/lytA,獲得的rLytA對(duì)肺炎鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和青霉素G耐藥株的MIC分別為8μg/ml和16μg/ml;以rLytA對(duì)標(biāo)準(zhǔn)株及耐藥株MIC的3倍濃度,分別作用于標(biāo)準(zhǔn)株及耐藥株,與未加藥物的對(duì)照組相比,rLytA作用于標(biāo)準(zhǔn)株3h后細(xì)菌數(shù)顯著減少(P0.05),且效果持續(xù)至7h(P0.05);對(duì)青霉素G耐藥株作用3h時(shí)顯示具有抑菌效果(P0.01),且抑菌作用持續(xù)至7h(P0.01)。結(jié)論一定濃度的rLytA對(duì)肺炎鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株和耐藥株均顯示出抑菌作用,且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),具有作為抗菌藥物的可能性。
【作者單位】： 大連醫(yī)科大學(xué)臨床免疫與微生物教研室;大連市第五人民醫(yī)院內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 肺炎鏈球菌 自溶素 抗菌藥物 基因表達(dá)
【基金】：遼寧省科技廳自然科技基金項(xiàng)目(No.201202053)
【分類(lèi)號(hào)】：R378.12
【正文快照】： ***鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)是定植人鼻咽部的正常菌群,但在某些因素的刺激影響下也會(huì)成為致病菌,是社區(qū)獲得性肺炎的主要病原體[1],還可導(dǎo)致腹膜炎、中耳炎和腦膜炎等多種疾病[2-3]。目前肺***炎鏈球菌耐藥普遍性和多重性趨勢(shì)逐漸升高[4-5],開(kāi)發(fā)新的藥物治療肺炎鏈

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陸德源;;肺炎鏈球菌表面蛋白A是肺炎鏈球菌的一種乳鐵蛋白結(jié)合蛋白[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2000年02期

2 張雪梅;肺炎鏈球菌自然轉(zhuǎn)化機(jī)制的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2002年06期

3 秦燕;劉仁貴;;肺炎鏈球菌自然轉(zhuǎn)化機(jī)制的研究進(jìn)展[J];大理學(xué)院學(xué)報(bào);2008年10期

4 張守釵;劉小康;;肺炎鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素耐藥的研究現(xiàn)狀[J];四川生理科學(xué)雜志;2008年02期

5 樊有;施毅;;肺炎鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素耐藥的研究進(jìn)展[J];中國(guó)感染與化療雜志;2008年02期

6 賁亞t ;崔古貞;劉德立;;肺炎鏈球菌HMG-CoA合成酶基因克隆和表達(dá)[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年05期

7 姚開(kāi)虎;張敬仁;;國(guó)內(nèi)耐藥肺炎鏈球菌的流行現(xiàn)狀[J];傳染病信息;2011年02期

8 江麗君;;中國(guó)科技大學(xué)有關(guān)肺炎鏈球菌的新發(fā)現(xiàn)[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2012年04期

9 楊帆;肺炎鏈球菌耐藥性研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2001年07期

10 孟江萍,尹一兵;肺炎鏈球菌致病機(jī)理的最新研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)雜志;2002年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃小翠;崔亞利;;兒童使用的肺炎鏈球菌疫苗研究進(jìn)展[A];第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

2 張剛;馮婕;;肺炎鏈球菌對(duì)莫西沙星耐藥發(fā)展的突變途徑研究[A];2012年第五屆全國(guó)微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2012年

3 龐丹;王虹;楊曉亮;劉鑫;張雪梅;尹一兵;;肺炎鏈球菌的一種莢膜表面聚合連接酶的鑒定[A];重慶市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2009年

4 李忠云;周本立;張岷;;肺炎鏈球菌性疾病與肺炎球鏈菌多糖疫苗[A];“環(huán)境與健康”學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2007年

5 李耘;王珊;薛峰;鄭波;劉健;呂媛;;大環(huán)內(nèi)酯耐藥肺炎鏈球菌分子特性研究[A];第8屆全國(guó)抗菌藥物臨床藥理學(xué)術(shù)會(huì)議暨北京大學(xué)臨床藥理研究所成立三十周年論文集[C];2010年

6 牛司強(qiáng);羅淼;尹一兵;汪德強(qiáng);;新肺炎鏈球菌毒力因子GHIA的鑒定及其結(jié)構(gòu)功能研究[A];中國(guó)晶體學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)（大分子分會(huì)場(chǎng)）論文摘要集[C];2012年

7 王雷;楊益虎;杜洋;張敬仁;周叢照;陳宇星;;肺炎鏈球菌R6的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ProWX的結(jié)構(gòu)和功能研究[A];中國(guó)晶體學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)（大分子分會(huì)場(chǎng)）論文摘要集[C];2012年

8 柏曉輝;周叢照;陳宇星;;在肺炎鏈球菌中大量表達(dá)糖基化蛋白PsrP[A];中國(guó)晶體學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)（大分子分會(huì)場(chǎng)）論文摘要集[C];2012年

9 牛司強(qiáng);尹一兵;黃愛(ài)龍;汪德強(qiáng);;新肺炎鏈球菌毒力因子GHIA三維結(jié)構(gòu)與功能研究[A];2012全國(guó)臨床微生物與感染免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

10 楊曉亮;崔亞利;王虹;劉鑫;龐丹;班艷娜;尹一兵;張雪梅;;肺炎鏈球菌假想蛋白SPD-0873溶菌酶活性的分析和鑒定[A];重慶市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 衛(wèi)生部北京醫(yī)院 張秀珍;肺炎鏈球菌對(duì)青霉素耐藥率上升快[N];健康報(bào);2008年

2 葛秋芳;英科學(xué)家發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌產(chǎn)生抗藥性的機(jī)理[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

3 劉霞;免疫系統(tǒng)對(duì)抗肺炎感染機(jī)制揭開(kāi)[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

4 葛秋芳;病菌為何不怕青霉素了？科學(xué)家解謎[N];新華每日電訊;2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孟江萍;應(yīng)用啟動(dòng)子誘捕策略篩選并初步鑒定肺炎鏈球菌宿主體內(nèi)誘導(dǎo)基因[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

2 張雪梅;肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化對(duì)細(xì)菌毒力和耐藥性影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

3 馬千里;肺炎鏈球菌毒力蛋白基因工程疫苗優(yōu)勢(shì)抗原篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 賁亞t ;肺炎鏈球菌HMG-CoA合成酶和還原酶基因克隆表達(dá)及功能研究[D];華中師范大學(xué);2008年

5 牛司強(qiáng);一種肺炎鏈球菌溶菌酶樣假想蛋白質(zhì)SP0987的結(jié)構(gòu)和功能研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

6 李南;肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）的同源模建及其先導(dǎo)抑制劑的篩選和鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

7 胥文春;DFI體內(nèi)篩選肺炎鏈球菌致腦膜炎相關(guān)基因[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

8 范楷;肺炎鏈球菌HtrA蛋白PDZ結(jié)構(gòu)域和嗜鹽古菌SAMPs蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

9 張群;ClpE在肺炎鏈球菌致病過(guò)程中的作用機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

10 柏曉輝;肺炎鏈球菌肽聚糖水解酶LytB與耐藥相關(guān)蛋白Sp0010的結(jié)構(gòu)與功能研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高華;肺炎鏈球菌生物學(xué)特性鑒定及耐藥性分析[D];北京生物制品研究所;2004年

2 吳艷麗;肺炎鏈球菌表面粘附素A的原核表達(dá)和免疫保護(hù)性的初步研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

3 姚成;肺炎鏈球菌耐藥性、分子流行病學(xué)和耐藥機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

4 趙清;篩選受轉(zhuǎn)化調(diào)控的肺炎鏈球菌毒力基因[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

5 陽(yáng)小燕;肺炎鏈球菌抑菌藥物作用的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];暨南大學(xué);2011年

6 陳保德;肺炎鏈球菌自殺性熒光報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建與評(píng)價(jià)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

7 賀翔;錳離子對(duì)肺炎鏈球菌影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];暨南大學(xué);2011年

8 王一平;轉(zhuǎn)化缺失的無(wú)莢膜肺炎鏈球菌作為活疫苗候選菌株的安全性及保護(hù)效果評(píng)價(jià)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

9 吳凱峰;三種肺炎鏈球菌表面蛋白聯(lián)合誘導(dǎo)的特異性IgG抗體介導(dǎo)的免疫保護(hù)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

10 薛新娜;肺炎鏈球菌表面蛋白A基因和溶血素基因的融合及高效表達(dá)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1135565