本文關(guān)鍵詞：小鼠皮膚來源干細(xì)胞向精子樣細(xì)胞分化的研究

  更多相關(guān)文章： 皮膚來源干細(xì)胞 細(xì)胞分化 原始生殖細(xì)胞 精子樣細(xì)胞

【摘要】：近年來,男性不育患者約占我國(guó)育齡人口的10%,而40%以上的男性不育是由于精子發(fā)生異常造成的。雖然輔助生殖技術(shù)給許多患者帶來了曙光,但是單靠輔助生殖和藥物治療還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。利用皮膚來源干細(xì)胞向生殖細(xì)胞的定向分化可以在體外建立生殖細(xì)胞發(fā)生的模型并最終獲得功能性配子,這對(duì)研究生殖細(xì)胞發(fā)生的調(diào)控機(jī)制以及治療男性不育癥等方面具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為模型,誘導(dǎo)皮膚來源干細(xì)胞向精子分化,研究結(jié)果如下： 1、分離的新生小鼠皮膚經(jīng)機(jī)械剪切和胰酶消化后,單細(xì)胞懸浮培養(yǎng)可獲得球狀克隆。這些皮膚來源干細(xì)胞(SDSCs)克隆經(jīng)體外傳代后,可檢測(cè)到β-Integrin和Oct-4等干細(xì)胞特異性蛋白的表達(dá)。 2、SDSCs體外傳代2次后吹打成單細(xì)胞,懸浮培養(yǎng)后形成擬胚體(Embryoid Body, EB)。將4天的EB消化成單細(xì)胞注射到免疫缺陷鼠的睪丸白膜下,一個(gè)月后可形成畸胎瘤,可向三個(gè)胚層分化,并形成三胚層典型的細(xì)胞類型。 3、EB消化成單細(xì)胞后與飼養(yǎng)層細(xì)胞共培養(yǎng),并利用細(xì)胞因子誘導(dǎo)其向原始生殖細(xì)胞樣細(xì)胞(Primordial Germ Cells-like Cells, PLCs)分化。在誘導(dǎo)的第4天,PLCs開始出現(xiàn)。經(jīng)對(duì)早期生殖細(xì)胞特異的mRNA和蛋白檢測(cè)發(fā)現(xiàn),SDSCs分化來的PLCs與體內(nèi)PGCs有著相似的生物學(xué)特性。 4、收集PLCs繼續(xù)用精子發(fā)生培養(yǎng)液進(jìn)行誘導(dǎo)分化。在誘導(dǎo)的第5天,這些細(xì)胞開始表達(dá)生殖細(xì)胞和精子的特異蛋白；體外誘導(dǎo)第13天時(shí),經(jīng)流式分析發(fā)現(xiàn),SDSCs分化的單倍體生殖細(xì)胞的陽性率達(dá)到2.56%。 5、在PLCs分化的第6天,將miniMACS分選的SSEA-1陽性細(xì)胞注射到睪丸精細(xì)管中借助體內(nèi)微環(huán)境進(jìn)一步發(fā)育。組織學(xué)檢測(cè)證實(shí),移植的PLCs可在睪丸內(nèi)存活并發(fā)育成精子樣細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：皮膚來源干細(xì)胞 細(xì)胞分化 原始生殖細(xì)胞 精子樣細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R321
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 前言10-11
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1 干細(xì)胞定義11-14
• 1.1 胚胎干細(xì)胞11
• 1.2 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞11-12
• 1.3 成體干細(xì)胞12-14
• 1.3.1 皮膚干細(xì)胞生物學(xué)特性12-13
• 1.3.2 皮膚干細(xì)胞的定位13-14
• 2 胚胎時(shí)期生殖細(xì)胞的體內(nèi)發(fā)育14
• 3 生殖細(xì)胞體外培養(yǎng)14-15
• 4 不同類型干細(xì)胞體外向雄性配子分化15-18
• 4.1 胚胎干細(xì)胞向精子分化15-16
• 4.2 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞向精子分化16
• 4.3 成體干細(xì)胞向精子分化16-18
• 5 本實(shí)驗(yàn)研究意義18-19
• 第二部分 試驗(yàn)研究19-44
• 1 材料與方法19-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-30
• 1.3 統(tǒng)計(jì)方法30-31
• 2 結(jié)果與分析31-41
• 2.1 小鼠皮膚來源干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及多能性檢測(cè)31-32
• 2.2 小鼠皮膚來源干細(xì)胞體外形成擬胚體32-34
• 2.3 小鼠皮膚來源干細(xì)胞經(jīng)擬胚體后具有多向分化的潛能34
• 2.4 小鼠皮膚來源干細(xì)胞體外向PLCs誘導(dǎo)及分析34-36
• 2.5 小鼠皮膚干細(xì)胞來源的PLCs體外向精子誘導(dǎo)分化及鑒定36-38
• 2.6 受體鼠的制備38-39
• 2.7 12.5dpc雄性生殖嵴miniMACS分選后體內(nèi)移植及檢測(cè)39-40
• 2.8 PLCs minMACS分選后體內(nèi)移植及檢測(cè)40-41
• 3 討論41-44
• 3.1 皮膚干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化的優(yōu)越性41
• 3.2 建立穩(wěn)定高效的PLCs誘導(dǎo)體系41-42
• 3.3 體外誘導(dǎo)的精子樣細(xì)胞功能性問題42
• 3.4 PLCs的分選對(duì)移植效率的影響42-43
• 3.5 受體鼠對(duì)移植效率的影響43-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 導(dǎo)師組意見50-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)介52-53
• 發(fā)表論文及專利53

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 熊文瑗;;干細(xì)胞讓你長(zhǎng)出新耳朵[J];大眾科技;2001年02期

2 韓忠朝;血液干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2002年04期

3 ;科學(xué)家用干細(xì)胞培養(yǎng)出了存活的組織器官[J];生命科學(xué)儀器;2003年05期

4 李重錫;;各國(guó)政府對(duì)干細(xì)胞研究的支持力度及其相關(guān)論文發(fā)表和專利申請(qǐng)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年15期

5 朱麗華;;干細(xì)胞研究進(jìn)展消息[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2010年05期

6 朱麗華;;干細(xì)胞研究進(jìn)展消息[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2012年05期

7 朱麗華;;干細(xì)胞研究進(jìn)展消息[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2012年06期

8 朱麗華;;干細(xì)胞研究進(jìn)展消息[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2012年07期

9 袁寶珠;;治療性干細(xì)胞產(chǎn)品的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2013年05期

10 張?zhí)锟?;干細(xì)胞研究生機(jī)勃勃[J];知識(shí)就是力量;2010年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李強(qiáng);郭學(xué)平;;透明質(zhì)酸應(yīng)用于干細(xì)胞培養(yǎng)的研究進(jìn)展[A];2011中國(guó)（威海）干細(xì)胞與組織工程治療前沿論壇論文集[C];2011年

2 張可華;袁寶珠;;治療性干細(xì)胞產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

3 高寶成;陳堅(jiān);萬鋒;;U251在干細(xì)胞培養(yǎng)條件下的側(cè)群細(xì)胞表型及[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 孫玉華;任曉帥;鄧怡;徐安秀;趙熒暉;魏世成;;共價(jià)接枝生物分子構(gòu)建培養(yǎng)皿表面干細(xì)胞培養(yǎng)微環(huán)境及其對(duì)粘附功能的評(píng)價(jià)[A];第八屆全國(guó)口腔材料學(xué)術(shù)交流會(huì)暨中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)口腔材料專業(yè)委員會(huì)2013年會(huì)論文集[C];2013年

5 孫建軍;;脊髓彌漫性星形細(xì)胞瘤干細(xì)胞的培養(yǎng)和建模[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 鄭穎t牎∥飧，

本文編號(hào)：1135573