本文關(guān)鍵詞：半固體培養(yǎng)及快速篩選策略在惡性瘧原蟲相關(guān)單克隆抗體制備中的應(yīng)用

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【摘要】：目的以惡性瘧原蟲富組氨酸蛋白單克隆抗體的制備為例,分析半固體培養(yǎng)技術(shù)和篩選鑒定策略在單克隆抗體制備中的關(guān)鍵作用。方法用惡性瘧原蟲富組氨酸蛋白重組抗原(re Pf-HRP)免疫BALB/c小鼠,將免疫小鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤SP20細(xì)胞融合,于含2%甲基纖維素的半固體培養(yǎng)基中培養(yǎng),使融合細(xì)胞呈集落化生長;將單細(xì)胞集落轉(zhuǎn)移至液體培養(yǎng)基中培養(yǎng);建立不同的抗原和ELISA檢測方法對培養(yǎng)上清進(jìn)行篩選;經(jīng)粗篩和特異性篩選為陽性的細(xì)胞株置液氮保存。凍存復(fù)蘇后,對穩(wěn)定分泌特異性抗體的單抗細(xì)胞株進(jìn)一步分析腹水產(chǎn)量、抗體亞類、抗體識別位點、抗體的親和常數(shù)及配對檢測抗原的靈敏度。結(jié)果細(xì)胞融合后經(jīng)半固體培養(yǎng)獲得的單克隆細(xì)胞株為915個,粗篩的克隆陽性率為37.8%(346/915);特異性篩選的克隆陽性率僅占粗篩檢測陽性的2.6%(9/346),占總克隆數(shù)的0.98%(9/915),經(jīng)液氮凍存復(fù)蘇鑒定,獲得了8株穩(wěn)定分泌特異性抗體的單抗細(xì)胞株;經(jīng)腹水產(chǎn)量、抗體亞類、抗體識別位點、抗體的親和常數(shù)及配對檢測抗原的靈敏度等檢測,最終獲得了2株可用于快速檢測惡性瘧患者血液樣本中特異性循環(huán)抗原的配對抗體。結(jié)論半固體培養(yǎng)保證了可供篩選的融合細(xì)胞的數(shù)量,粗篩和特異性篩選結(jié)合的策略保證了快速篩選出特異性克隆。
【作者單位】： 上海市疾病預(yù)防控制中心/上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究院;
【關(guān)鍵詞】： 單克隆抗體 制備技術(shù) 半固體培養(yǎng) 篩選鑒定策略 惡性瘧原蟲 富組氨酸蛋白
【分類號】：R382.31
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:jlsh_819@163.com單克隆抗體(monoclonal antibody)是由同一個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的,能識別特定抗原決定簇的具有高度特異性和均一性的抗體。由于單抗具有純度高、特異性強(qiáng)、利于實驗的標(biāo)準(zhǔn)化及可大量生產(chǎn)供應(yīng)等特點,自1975年雜交瘤單克隆抗體技術(shù)出

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本文編號：1120265