本文關鍵詞：SETD4蛋白在Bac-to-Bac桿狀病毒系統(tǒng)的表達

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【摘要】：目的通過昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并純化SETD4蛋白,為深入探討SETD4的功能奠定基礎。方法提取小鼠正常肝組織的RNA,通過RT-PCR擴增SETD4基因,并克隆至p Fast Bac-HTB構建重組載體,再轉座獲得重組桿粒;通過脂質體介導將重組桿粒轉染SF9細胞產生重組病毒,擴增病毒感染細胞并獲得重組蛋白;利用Ni2+親和柱來純化蛋白,并通過Western Blot及考馬斯亮藍染色鑒定SETD4蛋白。結果經雙酶切鑒定及測序證實SETD4基因插入了供體質粒;經PCR鑒定證實SETD4基因插入了穿梭載體;經考馬斯亮藍染色證實純化得到重組蛋白,用His-Tag抗體和SETD4特異性抗體在50 k D處可檢測到目的條帶。結論成功利用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)夠表達了SETD4,并純化了SETD4。
【作者單位】： 廣東省蛋白質組學重點實驗室 南方醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理生理學教研室;
【關鍵詞】： SETD蛋白 桿狀病毒表達系統(tǒng) 表達 純化
【基金】：國家自然科學基金(81072425,81272149)
【分類號】：Q939.4;R3416
【正文快照】： SET家族蛋白是在14年前由Stephen等人首次發(fā)現的,這一家族成員在酵母及動、植物細胞中廣泛存在,其共同特征之一是含有一個高度保守的SET結構域[1,2]。越來越多的證據表明,SET家族蛋白具有組蛋白及非組蛋白甲基化轉移酶的功能,能夠調控基因表達,參與基因轉錄抑制及異染色體沉寂

【參考文獻】

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7 黎彥t，

本文編號：1078045