本文關(guān)鍵詞：SETD4蛋白在Bac-to-Bac桿狀病毒系統(tǒng)的表達(dá)

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【摘要】：目的通過昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并純化SETD4蛋白,為深入探討SETD4的功能奠定基礎(chǔ)。方法提取小鼠正常肝組織的RNA,通過RT-PCR擴(kuò)增SETD4基因,并克隆至p Fast Bac-HTB構(gòu)建重組載體,再轉(zhuǎn)座獲得重組桿粒;通過脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組桿粒轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞產(chǎn)生重組病毒,擴(kuò)增病毒感染細(xì)胞并獲得重組蛋白;利用Ni2+親和柱來純化蛋白,并通過Western Blot及考馬斯亮藍(lán)染色鑒定SETD4蛋白。結(jié)果經(jīng)雙酶切鑒定及測序證實(shí)SETD4基因插入了供體質(zhì)粒;經(jīng)PCR鑒定證實(shí)SETD4基因插入了穿梭載體;經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色證實(shí)純化得到重組蛋白,用His-Tag抗體和SETD4特異性抗體在50 k D處可檢測到目的條帶。結(jié)論成功利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)夠表達(dá)了SETD4,并純化了SETD4。
【作者單位】： 廣東省蛋白質(zhì)組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： SETD蛋白 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) 表達(dá) 純化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81072425,81272149)
【分類號(hào)】：Q939.4;R3416
【正文快照】： SET家族蛋白是在14年前由Stephen等人首次發(fā)現(xiàn)的,這一家族成員在酵母及動(dòng)、植物細(xì)胞中廣泛存在,其共同特征之一是含有一個(gè)高度保守的SET結(jié)構(gòu)域[1,2]。越來越多的證據(jù)表明,SET家族蛋白具有組蛋白及非組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶的功能,能夠調(diào)控基因表達(dá),參與基因轉(zhuǎn)錄抑制及異染色體沉寂

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 薛紅,田方;SET基因家族研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2005年03期

2 葉萍;蔡軍偉;付曉霞;崔航;劉亞偉;陳小歡;羅海華;李煜生;劉蕓;姜勇;劉靖華;;p38信號(hào)通路對(duì)SETD4在細(xì)胞中的表達(dá)和定位的影響[J];中國病理生理雜志;2012年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 尚明保;楊旬旬;吳風(fēng)瑞;丁彪;劉勇;李文雍;;動(dòng)物組蛋白H3K4三甲基化轉(zhuǎn)移酶MLL3的生物信息學(xué)分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年07期

2 潘志敏;羅葉婷;郭菲;鄭超;馬勇;李廣生;程細(xì)高;;多西環(huán)素調(diào)控的重組桿狀病毒載體Ac-EGFP及Ac-HGF的構(gòu)建[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年08期

3 劉春菊;任煒杰;王志亮;;桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在獸用亞單位疫苗領(lǐng)域應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年09期

4 尚明保;楊旬旬;吳風(fēng)瑞;丁彪;劉勇;李文雍;;動(dòng)物組蛋白H3K4三甲基化轉(zhuǎn)移酶MLL3的生物信息學(xué)分析(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2012年03期

5 祁靜;劉濤;李珍;貢成良;吳海蘋;張春;;Bac-to-Bac/BmNPV桿狀病毒在家蠶幼蟲中表達(dá)重組鱟C因子[J];生物工程學(xué)報(bào);2014年10期

6 劉拂曉;吳曉東;李林;柳增善;王志亮;;經(jīng)密碼子優(yōu)化的小反芻獸疫病毒H蛋白在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年04期

7 黎彥t，

本文編號(hào)：1078045