本文關(guān)鍵詞：人臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離條件的優(yōu)化及傳代效應(yīng)的流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)

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【摘要】：目的觀察不同膠原酶消化方法對(duì)人臍帶沃頓膠間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)分離和培養(yǎng)結(jié)果的影響,并鑒定其分化潛能;探討傳代效應(yīng)對(duì)其免疫表型的影響。方法將制備好的臍帶標(biāo)本分別加入Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅳ型膠原酶,持續(xù)消化4~18 h,篩網(wǎng)過(guò)濾,離心收集細(xì)胞,用DMEM/F12培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度4.8×103~1×104/cm2,接種培養(yǎng),比較不同消化法分離人臍帶沃頓膠MSC的效果。Von kossa鈣結(jié)節(jié)染色、四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記鑒定人臍帶沃頓膠MSC向成骨方向分化的能力,RT-PCR鑒定其向心肌細(xì)胞分化的能力。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)連續(xù)傳代后MSC的免疫表型變化。結(jié)果Ⅰ型膠原酶消化法能夠從人臍帶沃頓膠獲取了數(shù)量較多、活力較高的MSC,而且細(xì)胞出現(xiàn)伸展的時(shí)間及原代培養(yǎng)時(shí)間均短于Ⅱ型膠原酶及Ⅳ型膠原酶消化法。表面標(biāo)記分析顯示:隨著傳代次數(shù)的增加,陽(yáng)性標(biāo)記CD29、CD44、CD73、CD90、CD105的表達(dá)百分率沒有變化,而陰性標(biāo)記CD31、CD34和HLA-DR的表達(dá)率增加明顯。體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)表明:來(lái)源于人臍帶沃頓膠的MSC具有體外成骨和成心肌樣細(xì)胞分化的能力。結(jié)論Ⅰ型膠原酶消化法簡(jiǎn)單易行,對(duì)細(xì)胞損傷小,能穩(wěn)定、高效地從人臍帶沃頓膠中分離出MSC。
【作者單位】： 協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 血液學(xué)研究所 血液病醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 臍帶 間質(zhì)干細(xì)胞 膠原酶類 傳代效應(yīng) 沃頓膠
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 臍帶是連于胚胎臍部與胎盤間的索狀結(jié)構(gòu),外被羊膜、內(nèi)含分化的黏液性結(jié)締組織,結(jié)締組織內(nèi)除閉鎖的卵黃囊和尿囊外,還有臍動(dòng)脈和臍靜脈[1]。臍帶中的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)可來(lái)源于沃頓膠、臍血管周圍、臍血及臍靜脈血管內(nèi)皮下,人臍帶MSC在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1073437