抗LAMP2單克隆抗體的制備及初步鑒定
發(fā)布時(shí)間:2017-10-20 13:12
本文關(guān)鍵詞:抗LAMP2單克隆抗體的制備及初步鑒定
【摘要】:目的:通過(guò)制備免疫肽段并免疫BALB/c小鼠來(lái)制備抗LAMP2單克隆抗體,并對(duì)抗體進(jìn)行初步鑒定。 方法:(1)用博奧森LAMP2蛋白,并將此多肽分別連接鑰孔戚血藍(lán)素(簡(jiǎn)稱(chēng):peptide-KLH)或牛血清蛋白(簡(jiǎn)稱(chēng):peptide-BSA);(2)以peptide-KLH作為抗原免疫BALB/c小鼠;(3)取血清效價(jià)大于1:10000的小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合,以peptide-BSA包被,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)雜交瘤細(xì)胞的上清進(jìn)行篩選;用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化;(4)單克隆抗體的大量制備是通過(guò)腹腔注射雜交瘤細(xì)胞而獲得;(5)用鼠單克隆抗體亞類(lèi)分型試劑盒鑒定抗體的亞類(lèi),,免疫組化方法表明制備的單克隆抗體能識(shí)別LAMP2蛋白。 結(jié)果:得到一株能穩(wěn)定分泌抗-LAMP2單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株;應(yīng)用免疫組化方法表明制備的抗-LAMP2的單克隆抗體能識(shí)別LAMP2抗原;此單克隆抗體的亞類(lèi)為IgG2a/κ。 結(jié)論:已獲得的雜交瘤細(xì)胞株能穩(wěn)定分泌目的單克隆抗體;免疫組化方法表明制備的單克隆抗體能識(shí)別LAMP2抗原,為更深入地研究LAMP2及其各亞型的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ),也為實(shí)驗(yàn)室后期制備LAMP2抗原的ELISA試劑盒準(zhǔn)備了條件。
【關(guān)鍵詞】:LAMP2 多肽 單克隆抗體
【學(xué)位授予單位】:延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類(lèi)號(hào)】:R392
【目錄】:
- 摘要5-6
- Abstract6-8
- 引言8-15
- 材料和方法15-23
- 結(jié)果23-25
- 討論25-26
- 結(jié)論26-27
- LAMP2 的最新研究進(jìn)展27-32
- 參考文獻(xiàn)29-32
- 自噬與腫瘤32-37
- 參考文獻(xiàn)35-37
- 致謝37-38
- 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章38
【共引文獻(xiàn)】
中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條
1 董志武;血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的調(diào)控及膜聯(lián)蛋白A7促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞自噬作用的研究[D];山東大學(xué);2011年
中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條
1 朱宇;抑制自噬對(duì)壓力超負(fù)荷大鼠心肌肥厚以及心臟收縮功能的影響[D];蘇州大學(xué);2009年
本文編號(hào):1067330
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