本文關(guān)鍵詞：兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外多向分化潛能的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化 成脂分化 成軟骨分化 組織工程 兔

【摘要】：目的利用體外分離培養(yǎng)兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞(synovium-derived mesenchymal stem cells, SMSCs),探討其在體外多向分化潛能。為其作為組織工程的種子細(xì)胞來源提供科學(xué)依據(jù)。 方法取4-6周齡的新西蘭大白兔4只,雌雄不限,體重1.5-1.8kg。取兔子膝關(guān)節(jié)滑膜組織,通過消化培養(yǎng)法從兔滑膜組織中分離出SMSCs并加以純化,進(jìn)一步在體外培養(yǎng)條件下研究其形態(tài)學(xué)、超微結(jié)構(gòu)、分子表型、增殖動力學(xué)等基本的生物學(xué)特性。行原代及傳代培養(yǎng),在光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),在電鏡下觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),并用流式細(xì)胞儀和免疫組化進(jìn)行細(xì)胞表面標(biāo)記物的檢測,MTT法測定第三代細(xì)胞的增殖情況,并繪制出生長曲線。待第3代細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶后移去細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液,分別加入特定培養(yǎng)液進(jìn)行成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化。成骨誘導(dǎo)7天后行Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色,10d后行堿性磷酸酶(ALP)染色檢測,21d后行茜素紅染S染色及von-kossa染色檢測；21天后通過電鏡檢測誘導(dǎo)后SMSCs的表面結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)；成脂誘導(dǎo)21d后行油紅0染色檢測；成軟骨誘導(dǎo)21d后行甲苯胺藍(lán)染色、免疫組織化學(xué)染色檢測。取生長狀態(tài)良好第三代細(xì)胞兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞接種到自制的異種生物衍生骨支架材料上成骨誘導(dǎo)體外構(gòu)建組織工程骨。 結(jié)果SMSCs原代培養(yǎng)24h后細(xì)胞形態(tài)呈細(xì)長或呈多角形；48h后細(xì)胞數(shù)量明顯增多,72h-96h后可見大量紡錘形細(xì)胞,其間散在分布少許小圓形細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測SMSCs表面標(biāo)記物CD55的表達(dá)為99.4%；免疫熒光檢測SMSCs表面標(biāo)記物CD90的表達(dá)陽性。第3代SMSCs的生長曲線符合干細(xì)胞的生長曲線。第三代與第七代細(xì)胞的增殖無明顯差異(p0.05)。第3代SMSCs通過透射電鏡下可見SMSCs較分散,細(xì)胞間無明顯連接結(jié)構(gòu),掃描電鏡下見細(xì)胞呈長梭形,有兩分支樣突起,SMSCs細(xì)胞核呈橢圓形,單核或雙核,通常有2-3個核仁。第3代SMSCs成骨誘導(dǎo)7天后行Ⅰ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性,10d后ALP染色陽性,21d時茜素紅S染色呈陽性,von-kossa染色陽性,SMSCs成骨誘導(dǎo)21天后通過掃描電鏡下見細(xì)胞成星形,胞體增大,透射電鏡下見誘導(dǎo)后細(xì)胞連接緊密,帶有大量微絨毛樣突起,交錯樣排列,細(xì)胞器更加豐富,線粒體明顯增多；成脂誘導(dǎo)21d后油紅0染色陽性；成軟骨誘導(dǎo)21d后甲苯胺藍(lán)染色陽性,Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色陽性。SMSCs能與自制的生物衍生骨支架材料粘附并增殖,可見成骨細(xì)胞貼附,SMSCs與支架有較好的相容性。 結(jié)論兔膝關(guān)節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs,兔SMSCs在體外誘導(dǎo)下具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化的潛能,SMSCs與自制的生物衍生骨支架材料有較好的相容性。有望成為組織工程理想的種子細(xì)胞來源,在骨和軟骨的再生修復(fù)中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化 成脂分化 成軟骨分化 組織工程 兔
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中英文縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一章 兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取分離、培養(yǎng)、增殖與鑒定12-28
• 一 引言12
• 二 材料與方法12-22
• 五 實驗結(jié)果22-24
• 六 討論24-27
• 七 結(jié)論27-28
• 第二章 兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞成骨和成脂誘導(dǎo)的實驗研究28-37
• 一.引言28
• 二.材料和方法28-32
• 三.實驗結(jié)果32-33
• 四 討論33-36
• 五 結(jié)論36-37
• 第三章 兔滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)的實驗研究37-45
• 一 引言37
• 二 材料與方法37-39
• 三 實驗結(jié)果39-40
• 四 討論40-44
• 五 結(jié)論44-45
• 二. 參考文獻(xiàn)45-53
• 三. 附圖53-58
• 四. 綜述58-85
• 參考文獻(xiàn)75-85
• 五. 致謝85-86
• 六. 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄86

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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4 朱恒;江小霞;吳英;劉元林;李秀森;張毅;毛寧;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液來源的間充質(zhì)干細(xì)胞分離鑒定及其對破骨細(xì)胞發(fā)育的影響[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2009年04期

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本文編號：1051467