本文關鍵詞：兔滑膜間充質干細胞體外多向分化潛能的實驗研究

  更多相關文章： 滑膜間充質干細胞 成骨分化 成脂分化 成軟骨分化 組織工程 兔

【摘要】：目的利用體外分離培養(yǎng)兔滑膜間充質干細胞(synovium-derived mesenchymal stem cells, SMSCs),探討其在體外多向分化潛能。為其作為組織工程的種子細胞來源提供科學依據(jù)。 方法取4-6周齡的新西蘭大白兔4只,雌雄不限,體重1.5-1.8kg。取兔子膝關節(jié)滑膜組織,通過消化培養(yǎng)法從兔滑膜組織中分離出SMSCs并加以純化,進一步在體外培養(yǎng)條件下研究其形態(tài)學、超微結構、分子表型、增殖動力學等基本的生物學特性。行原代及傳代培養(yǎng),在光鏡下觀察細胞形態(tài),在電鏡下觀察細胞超微結構,并用流式細胞儀和免疫組化進行細胞表面標記物的檢測,MTT法測定第三代細胞的增殖情況,并繪制出生長曲線。待第3代細胞長滿培養(yǎng)瓶后移去細胞基礎培養(yǎng)液,分別加入特定培養(yǎng)液進行成骨、成脂、成軟骨誘導分化。成骨誘導7天后行Ⅰ型膠原免疫細胞化學染色,10d后行堿性磷酸酶(ALP)染色檢測,21d后行茜素紅染S染色及von-kossa染色檢測；21天后通過電鏡檢測誘導后SMSCs的表面結構及超微結構；成脂誘導21d后行油紅0染色檢測；成軟骨誘導21d后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色檢測。取生長狀態(tài)良好第三代細胞兔滑膜間充質干細胞接種到自制的異種生物衍生骨支架材料上成骨誘導體外構建組織工程骨。 結果SMSCs原代培養(yǎng)24h后細胞形態(tài)呈細長或呈多角形；48h后細胞數(shù)量明顯增多,72h-96h后可見大量紡錘形細胞,其間散在分布少許小圓形細胞。流式細胞儀檢測SMSCs表面標記物CD55的表達為99.4%；免疫熒光檢測SMSCs表面標記物CD90的表達陽性。第3代SMSCs的生長曲線符合干細胞的生長曲線。第三代與第七代細胞的增殖無明顯差異(p0.05)。第3代SMSCs通過透射電鏡下可見SMSCs較分散,細胞間無明顯連接結構,掃描電鏡下見細胞呈長梭形,有兩分支樣突起,SMSCs細胞核呈橢圓形,單核或雙核,通常有2-3個核仁。第3代SMSCs成骨誘導7天后行Ⅰ型膠原免疫細胞化學染色陽性,10d后ALP染色陽性,21d時茜素紅S染色呈陽性,von-kossa染色陽性,SMSCs成骨誘導21天后通過掃描電鏡下見細胞成星形,胞體增大,透射電鏡下見誘導后細胞連接緊密,帶有大量微絨毛樣突起,交錯樣排列,細胞器更加豐富,線粒體明顯增多；成脂誘導21d后油紅0染色陽性；成軟骨誘導21d后甲苯胺藍染色陽性,Ⅱ型膠原免疫組織化學染色陽性。SMSCs能與自制的生物衍生骨支架材料粘附并增殖,可見成骨細胞貼附,SMSCs與支架有較好的相容性。 結論兔膝關節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs,兔SMSCs在體外誘導下具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化的潛能,SMSCs與自制的生物衍生骨支架材料有較好的相容性。有望成為組織工程理想的種子細胞來源,在骨和軟骨的再生修復中發(fā)揮重要作用。
【關鍵詞】：滑膜間充質干細胞 成骨分化 成脂分化 成軟骨分化 組織工程 兔
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中英文縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 第一章 兔滑膜間充質干細胞的獲取分離、培養(yǎng)、增殖與鑒定12-28
• 一 引言12
• 二 材料與方法12-22
• 五 實驗結果22-24
• 六 討論24-27
• 七 結論27-28
• 第二章 兔滑膜間充質干細胞成骨和成脂誘導的實驗研究28-37
• 一.引言28
• 二.材料和方法28-32
• 三.實驗結果32-33
• 四 討論33-36
• 五 結論36-37
• 第三章 兔滑膜間充質干細胞成軟骨誘導的實驗研究37-45
• 一 引言37
• 二 材料與方法37-39
• 三 實驗結果39-40
• 四 討論40-44
• 五 結論44-45
• 二. 參考文獻45-53
• 三. 附圖53-58
• 四. 綜述58-85
• 參考文獻75-85
• 五. 致謝85-86
• 六. 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文目錄86

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：1051467