本文關(guān)鍵詞：CD38基因缺失對(duì)巨噬細(xì)胞遷移及其炎癥因子釋放的影響及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： CD38 FOXO1 TLR4 NF-кB MCP-1 Ccr2 炎癥反應(yīng)

【摘要】：背景與目的： 炎癥反應(yīng)在多種疾病尤其是慢性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，如心血管疾病、癌癥、糖尿病等。引起炎癥反應(yīng)的原因很多，其中巨噬細(xì)胞的激活及其所引起的多種炎癥因子如MCP-1、TNF-α、IL-1β等表達(dá)量增加起著重要作用。CD38蛋白分子是一種雙功能酶，該酶同時(shí)具有環(huán)化酶和水解酶活性。它在細(xì)胞內(nèi)以NAD+為底物合成cADPR，同時(shí)可以催化cADPR形成ADPR，以此調(diào)節(jié)NAD+的濃度。一般認(rèn)為，CD38是哺乳類細(xì)胞NAD+的主要代謝酶。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作發(fā)現(xiàn)，CD38基因缺失可顯著增加高脂飲食誘導(dǎo)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)的巨噬細(xì)胞侵潤(rùn)。本論文通過觀察CD38對(duì)巨噬細(xì)胞遷移，檢測(cè)炎癥相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子FOXO1、NF-кB的表達(dá)，探討CD38基因缺失在巨噬細(xì)胞所參與的炎癥過程中的作用，并闡明其在炎癥反應(yīng)中可能的分子機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法： 1.原代巨噬細(xì)胞的提取與培養(yǎng)：體外分離培養(yǎng)小鼠骨髓單核細(xì)胞，，經(jīng)7天體外誘導(dǎo)出高純度（大于90%）的巨噬細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2.巨噬細(xì)胞的遷移：通過劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組CD38-/-與對(duì)照組WT巨噬細(xì)胞遷移情況。 3.巨噬細(xì)胞基因及細(xì)胞因子的分泌：1）利用免疫熒光檢測(cè)CD38基因缺失對(duì)FOXO1核轉(zhuǎn)移影響；2）利用Elisarray檢測(cè)M1型細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β及M2型細(xì)胞因子IL10、IFN蛋白分泌情況，同時(shí)利用Western Blot技術(shù)對(duì)MCP-1、FOXO1、TLR4、NF-κB、Ccr2蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、利用免疫熒光檢測(cè)小鼠巨噬細(xì)胞特異性標(biāo)記F4/80陽性率較高，細(xì)胞純度較高滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2、CD38基因缺失促進(jìn)巨噬細(xì)胞的遷移。 3、CD38基因缺失促進(jìn)FOXO1核轉(zhuǎn)移和炎癥相關(guān)蛋白MCP-1、TLR4、NF-κB的表達(dá)以及M1型細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β蛋白分泌，對(duì)M2型細(xì)胞因子IL10、IFN無影響。 4、CD38基因缺失促進(jìn)單核細(xì)胞趨化因子受體CCR2蛋白的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： CD38基因缺失參與加重巨噬細(xì)胞所參與的炎癥反應(yīng)。其具體機(jī)制可能通過激活FOXO1/CCR2信號(hào)通路促進(jìn)巨噬細(xì)胞遷移，同時(shí)激活巨噬細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)通路從而引起炎癥因子MCP-1、TNF-α、IL-1β的分泌進(jìn)而加重炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：CD38 FOXO1 TLR4 NF-кB MCP-1 Ccr2 炎癥反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-18
• 1.1 CD38 簡(jiǎn)述11
• 1.2 炎癥11-12
• 1.3 與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子12-13
• 1.3.1 細(xì)胞因子12
• 1.3.2 單核細(xì)胞趨化因子-1（MCP-1）12-13
• 1.3.3 單核細(xì)胞趨化因子受體 Ccr213
• 1.4 Sirt1/FOXO1 信號(hào)通路13-15
• 1.4.1 Sirt113-14
• 1.4.2 FOXO114-15
• 1.5 TLR4/ NF-кB 與炎癥的發(fā)生15-18
• 1.5.1 NF-кB15-16
• 1.5.2 TLR416-18
• 第2章 CD38 基因缺失對(duì)巨噬細(xì)胞遷移的影響18-25
• 2.1 引言18
• 2.2 材料和方法18-22
• 2.2.1 巨噬細(xì)胞（macrophage）的原代培養(yǎng)及基因型鑒定18-20
• 2.2.2 巨噬細(xì)胞的遷移20-21
• 2.2.3 免疫熒光鑒定骨髓源巨噬細(xì)胞純度21-22
• 2.3 結(jié)果22-24
• 2.3.1 巨噬細(xì)胞（macrophage）基因型及純度鑒定22-23
• 2.3.2 CD38 基因缺失促進(jìn)巨噬細(xì)胞遷移23-24
• 2.4 討論24-25
• 2.4.1 體外培養(yǎng)小鼠骨髓源巨噬細(xì)胞24-25
• 第3章 CD38 基因缺失促進(jìn) NF-кB 及其調(diào)控的下游細(xì)胞因子表達(dá)25-34
• 3.1 引言25
• 3.2 材料和方法25-28
• 3.2.1 FoxO1 核定位25
• 3.2.2 TLR4、NF-κB、MCP-1 蛋白表達(dá)水平檢測(cè)25-27
• 3.2.3 熒光定量 PCR 檢測(cè)巨噬細(xì)胞炎性因子分泌27-28
• 3.2.4 Elisarray 方法檢測(cè)骨髓源巨噬細(xì)胞炎性因子分泌28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-32
• 3.3.1 CD38 基因缺失促進(jìn) Foxo1 入核28-29
• 3.3.2 CD38 基因缺失促進(jìn) TLR4 表達(dá)29
• 3.3.3 CD38 基因缺失促進(jìn) NF-κB 及炎癥因子表達(dá)29-32
• 3.4 討論32-34
• 3.4.1 Sirt1 對(duì) FoxO1 的影響32
• 3.4.2 TLR4/NF-кB 信號(hào)通路32
• 3.4.3 巨噬細(xì)胞的分型32-34
• 第4章 CD38 基因缺失促進(jìn)巨噬細(xì)胞 CCR2 表達(dá)34-38
• 4.1 引言34
• 4.2 材料和方法34-35
• 4.2.1 Foxo1 下游靶基因生物信息學(xué)的預(yù)測(cè)34-35
• 4.2.2 Ccr2 表達(dá)水平檢測(cè)35
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-37
• 4.3.1 CD38 基因缺失促進(jìn) CCR2 表達(dá)35-36
• 4.3.2 確定 CCR2 為 Foxo1 下游靶基因36-37
• 4.4 討論37-38
• 第5章 結(jié)論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)49-53

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