本文關鍵詞：蛋白磷酸酶2Ac介導Smad3中間連接區(qū)去磷酸化促腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的研究

  更多相關文章： 蛋白磷酸酶Ac 去磷酸化 細胞外基質(zhì)合成 EMT Smad中間連接區(qū)

【摘要】：目的:通過蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)過表達和小干擾RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人腎小管上皮細胞(HK-2細胞)后予以轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)刺激,觀察PP2Ac對細胞外基質(zhì)合成、腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)和Smad3中間連接區(qū)磷酸化的影響,探討PP2Ac促腎間質(zhì)纖維化的機制。方法:常規(guī)培養(yǎng)HK-2細胞,分為對照組、TGF-β1組和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染+TGF-β1組。采用RT-PCR和Western Blot法檢測PP2Ac、纖維連接蛋白(FN)、Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和E選擇素(E-cadherin)表達水平。采用Western blot法檢測Smad3、Smad3中間連接區(qū)p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表達情況。結果:RT-PCR和Western Blot結果均顯示:PP2Ac過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HK-2細胞再予TGF-β1刺激24h后,PP2Ac表達較TGF-β1組升高,同時FN、Col-Ⅰ和a-SMA表達明顯上調(diào),E-cadherin表達下調(diào);而PP2Ac小干擾RNA轉(zhuǎn)染HK-2細胞后再予TGF-β1刺激24h,較TGF-β1組,PP2Ac表達降低,FN、Col-Ⅰ和α-SMA表達減少,E-cadherin表達增高(P0.05)。Western Blot結果顯示:TGF-β1刺激HK-2細胞1h時PP2Ac和Smad3中間區(qū)磷酸化的蛋白表達均達到峰值;HK-2細胞轉(zhuǎn)染PP2Ac過表達質(zhì)粒再予TGF-β1刺激1h后,與單純TGF-β1刺激組比較,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表達均下降;而PP2Ac小干擾RNA轉(zhuǎn)染HK-2細胞再予TGF-β1刺激1h后,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)蛋白表達均增加(P0.05)。結論:PP2Ac促進腎小管上皮細胞外基質(zhì)的生成及EMT;PP2Ac介導腎小管上皮細胞Smad3中間連接區(qū)去磷酸化。
【作者單位】： 中南大學湘雅二醫(yī)院腎內(nèi)科;
【關鍵詞】： 蛋白磷酸酶Ac 去磷酸化 細胞外基質(zhì)合成 EMT Smad中間連接區(qū)
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81100486;81370792) 湖南省科技計劃項目(2013SK3036) 中華醫(yī)學會臨床醫(yī)學專項資金(13030400425)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)被認為是調(diào)節(jié)腎小管間質(zhì)纖維化最重要的因子之一[1],其主要通過TGF-β/Smad經(jīng)典信號通路調(diào)控腎間質(zhì)纖維化,而Smad3被認為是介導TGF-β信號轉(zhuǎn)導的關鍵因子[2]。Smad3蛋白c末端磷酸化可正向調(diào)控TGF-β信號轉(zhuǎn)導。然而,新近研究發(fā)現(xiàn),曾認為無特殊功能的Sm

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本文編號：1050037