本文關(guān)鍵詞：GⅡ-4型諾如病毒P粒子的表達(dá)及其與組織血型抗原結(jié)合的初步研究

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【摘要】：目的： 克隆諾如病毒（NVs）GⅡ-4型1991年至今五個(gè)不同年代變異株的P區(qū)基因，并表達(dá)、純化其蛋白，即P粒子；通過(guò)分析不同P粒子與其受體——人組織血型相關(guān)抗原（HBGAs）之間的結(jié)合模式，以確定GⅡ-4諾如病毒感染的宿主范圍，為防治GⅡ-4諾如病毒的感染提供科學(xué)數(shù)據(jù)。 方法： 選取五株不同年代GⅡ-4型諾如病毒變異株，分別克隆其ORF2區(qū)，以此為基礎(chǔ)擴(kuò)增P區(qū)并與PGEM-Teasy載體相連，得到重組質(zhì)粒PGEM-Teasy-P。之后用BamH I和Not I雙酶切將P區(qū)基因切下連接至PGEX-4T-1表達(dá)載體，得到PGEX-4T1-P表達(dá)質(zhì)粒。利用GST原核表達(dá)系統(tǒng)經(jīng)IPTG誘導(dǎo)、超聲破碎細(xì)胞后表達(dá)P蛋白（此時(shí)帶有GST蛋白標(biāo)簽）。利用瓊脂糖凝膠4B對(duì)P蛋白進(jìn)行純化并用thrombin凝血酶去除GST標(biāo)簽以形成二十四聚體的P粒子。利用制備成功的P粒子、實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的GⅡ-4型諾如病毒免疫家兔的血清，及從深圳收集的117份唾液標(biāo)本，用酶免疫分析試驗(yàn)（EIA）測(cè)定五株變異株的P粒子與受體組織血型相關(guān)抗原（HBGAs）之間的結(jié)合模式。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建了五株GⅡ-4型諾如病毒的PGEX-4T1-P表達(dá)質(zhì)粒。 2.制備了五株GⅡ-4型諾如病毒變異株的P粒子，大小為38KDa。 3.測(cè)定了五株GⅡ-4型諾如病毒變異株P(guān)粒子與受體HBGAs之間的結(jié)合模式，Camberwell株、95/96US株和2006b株與A型、B型、O型分泌型（O+）唾液結(jié)合，與O型非分泌型（O-）不結(jié)合，，Hunter株和Sakai株與A型、B型、O+型、O-型唾液均不結(jié)合。 結(jié)論： HBGAs與GⅡ-4型諾如病毒P粒子的結(jié)合呈現(xiàn)毒株特異性結(jié)合，Camberwell株、95/96US株和2006b株與A型、B型、O型分泌型（O+）唾液結(jié)合，與O型非分泌型（O-）不結(jié)合，Hunter株和Sakai株與A型、B型、O+型、O-型唾液均不結(jié)合。
【關(guān)鍵詞】：GⅡ-4諾如病毒 P粒子 組織血型相關(guān)抗原
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373
【目錄】：

• 主要英文縮略語(yǔ)索引5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-26
• 1. 試驗(yàn)材料13-16
• 2. 試驗(yàn)方法16-26
• 結(jié)果26-31
• 1. 五株 GⅡ-4 型 NVs ORF2 區(qū)的擴(kuò)增26
• 2. 五株 GⅡ-4 型 NVs P 區(qū)基因的擴(kuò)增26-27
• 3. 構(gòu)建 PGEM-Teasy-P 重組質(zhì)粒27
• 4. 構(gòu)建 PGEX-4T1-P 表達(dá)質(zhì)粒27-28
• 5. P 蛋白的小量表達(dá)28
• 6. SDS-PAGE 鑒定 P 粒子28-29
• 7. SDS-PAGE 鑒定 GST 標(biāo)簽蛋白、融合蛋白及 P 粒子29
• 8. 五株 GⅡ-4 NVs 與深圳 117 份唾液的 EIA 結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-31
• 討論31-34
• 1. GST 原核表達(dá)系統(tǒng)與 P 粒子的制備31-32
• 2. NVs 與 HBGAs 的結(jié)合模式研究32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述38-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文45-46
• 致謝46

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 徐錦;孫家娥;丁韻珍;蘇犁云;楊毅;;2001至2005年上海部分地區(qū)腹瀉住院患兒諾若病毒分子臨床流行病學(xué)研究[J];中國(guó)循證兒科雜志;2008年05期

2 林健東;楊北兵;陳靜濃;;諾如病毒感染國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇;2010年08期

3 張翠紅;封少龍;;諾如病毒研究進(jìn)展[J];中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng);2013年08期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 劉志華;廣州地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉感染研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

2 張曉紅;北京地區(qū)成人腹瀉諾如病毒的流行和分子特征的初步研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2009年

3 王瑞雪;天津地區(qū)嬰幼兒諾如病毒感染的分子流行病學(xué)特征[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

4 李永清;我國(guó)甘肅省五歲以下腹瀉住院兒童杯狀病毒分子流行病學(xué)研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

本文編號(hào)：1047195