發(fā)布時間：2017-10-13 18:16

  本文關(guān)鍵詞：蛋白酶激活受體2在人中性粒細胞彈性蛋白酶誘發(fā)氣道黏液速發(fā)式分泌中的作用及機制

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【摘要】：目的研究蛋白酶激活受體2(protease-activated receptor 2,PAR2)在人中性粒細胞彈性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)誘發(fā)氣道黏蛋白(mucin,MUC)5AC速發(fā)式分泌中的作用及機制。方法用Western blot法檢測對照組及NE刺激組Calu-3細胞中PARs的表達。NE分別干預(yù)野生型(空白對照組)及轉(zhuǎn)染PARs siRNA的Calu-3細胞,通過ELISA法檢測其上清液中MUC5AC的表達,采用Fluo-3AM熒光探針法檢測細胞內(nèi)Ca2+濃度、Western blot法檢測胞膜及胞質(zhì)中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)水平。NE分別刺激空白對照組、轉(zhuǎn)染PAR2siRNA組、細胞內(nèi)鈣離子螯合劑BAPTA-AM預(yù)處理組及PKC抑制劑Chelerythrine預(yù)處理組,再通過ELISA法檢測其上清液中MUC5AC濃度、細胞免疫熒光法測定細胞質(zhì)內(nèi)滯留的MUC5AC。結(jié)果 Calu-3細胞系中PAR1、PAR2、PAR3蛋白均呈陽性表達,其中以PAR2為主,而PAR4則呈近似陰性表達。NE刺激Calu-3細胞,其PAR1、PAR3表達較空白對照組無明顯變化(P0.05),而PAR2則較空白對照組明顯增加(P0.05)。NE刺激野生型Calu-3細胞,其上清液中MUC5AC分泌量及細胞內(nèi)Ca2+濃度較刺激前明顯增加(均P0.05);而轉(zhuǎn)染PAR2siRNA組,其MUC5AC分泌量增加不明顯(P0.05),細胞內(nèi)Ca2+濃度升高水平也不及空白對照組(P0.05)。同時,空白對照組PKC主要存在于胞質(zhì)中,當給予NE刺激以后,PKC被引導(dǎo)至胞膜。轉(zhuǎn)染PAR2siRNA,細胞內(nèi)Ca2+螯合劑BAPTA-AM及PKC選擇性抑制劑Chelerythrine預(yù)處理,均可部分削弱NE刺激后細胞上清液中MUC5AC水平的升高(均P0.05)。結(jié)論 NE刺激可導(dǎo)致Calu-3細胞PAR2表達上調(diào),并通過激活PAR2、增加細胞內(nèi)Ca2+濃度、PKC激活及膜移位導(dǎo)致MUC5AC的速發(fā)式分泌。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 中性粒細胞彈性蛋白酶 蛋白酶激活受體 信號通路 黏蛋白AC
【基金】：國家臨床重點專科專項經(jīng)費資助項目(衛(wèi)辦醫(yī)政函[2012]949號)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 臨床工作中我們發(fā)現(xiàn),慢性阻塞性肺病(COPD)急性加重期及哮喘重度發(fā)作尤其是致死性哮喘發(fā)作的患者,其氣道內(nèi)大量中性粒細胞募集,氣道黏液常呈“速發(fā)式”分泌。最終導(dǎo)致氣道阻塞、氣流受限,患者病死率顯著增加。因而對這種病態(tài)的氣道黏液分泌機制的研究成為臨床研究的重點,而黏

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本文編號：1026365