本文關(guān)鍵詞：CoxA16抗原檢測(cè)試劑研究及初步應(yīng)用

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【摘要】：柯薩奇病毒A組16型(Coxsackievirus A16, CoxA16)是引起兒童手足口病(Hand, Foot and Mouth Disease, HFMD)的主要病原之一。大多研究顯示HFMD重癥及死亡病例多由腸道病毒71型(Enterovirus71, EV71)引起,因而對(duì)CoxA16研究相對(duì)較少。近年來(lái),越來(lái)越多的研究指出CoxA16除引起HFMD普通病例外,也能引起心肌炎、心包炎、難治性休克及致死性肺炎等重癥病例,因此針對(duì)CoxA16疫苗研發(fā)及病原學(xué)診斷的研究在HFMD的公共衛(wèi)生防控體系中具有重要的意義。 建立一套靈敏、特異、穩(wěn)定、重復(fù)性好的病原檢測(cè)體系是CoxA16疫苗研究的關(guān)鍵技術(shù)之一,作為一種常規(guī)檢測(cè)病原微生物的方法,ELISA因其快速、靈敏、經(jīng)濟(jì)及可規(guī)�；膬�(yōu)點(diǎn)廣泛應(yīng)用于病原檢測(cè)中,同時(shí)能夠簡(jiǎn)便地應(yīng)用于CoxA16流行病學(xué)調(diào)查和臨床病原檢測(cè)。本研究以多抗為基礎(chǔ)建立CoxA16抗原檢測(cè)的雙抗體夾心ELISA法,通過(guò)方陣法和單因素法分別對(duì)ELISA體系的包被抗體濃度、酶標(biāo)抗體濃度、包被液、封閉液、封閉時(shí)間、樣品孵育時(shí)間、酶標(biāo)抗體孵育時(shí)間、顯色液及顯色時(shí)間等條件進(jìn)行優(yōu)化,確定優(yōu)化的ELISA檢測(cè)體系。 本研究制備了一套靈敏度參比品、特異性參比品、精密性參比品及抗原含量檢測(cè)參比品,根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》二部“藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”對(duì)檢測(cè)方法的線性、靈敏度、特異性、精密度和穩(wěn)定性等技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。最終建立的CoxA16抗原ELISA檢測(cè)體系在7U/ml-57U/ml范圍直線線性關(guān)系最佳,決定系數(shù)(R2)達(dá)0.995以上;最低檢測(cè)下限為7.1U/ml,可檢測(cè)到2×102～9×103CCID50活病毒；能檢測(cè)到10株分離自不同地區(qū)的CoxA16病毒,與CoxA16以外的10種腸道病毒無(wú)交叉反應(yīng)；變異系數(shù)CV%小于15%。使用熒光PCR、中和法及本研究建立的ELISA抗原檢測(cè)法檢測(cè)病毒培養(yǎng)液,顯示三種檢測(cè)結(jié)果一致性好；將建立的方法初步應(yīng)用于CoxA16純化工藝研究,能夠較好的監(jiān)控病毒出峰時(shí)間及病毒抗原含量。
【關(guān)鍵詞】：手足口病 腸道病毒 柯薩奇病毒A組16型 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 吸收實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R373.23;R392
【目錄】：

• 目錄3-5
• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-15
• 1 CoxA16流行情況7-8
• 2 CoxA16基因組結(jié)構(gòu)及分型8-9
• 3 病毒感染繁殖9-10
• 4 臨床感染癥狀10
• 5 病毒致病機(jī)制與機(jī)體免疫保護(hù)10-12
• 6 CoxA16診斷試劑研究現(xiàn)狀和應(yīng)用12-13
• 6.1 病毒分離12
• 6.2 血清學(xué)抗體檢測(cè)12-13
• 6.3 病毒的分子診斷13
• 7 課題研究意義、目的和思路13-15
• 材料與方法15-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.2 毒株15
• 1.3 細(xì)胞15
• 1.4 主要試劑及配制15-18
• 1.5 所用材料18
• 1.6 主要儀器18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-28
• 2.1 抗CoxA16血清的制備及檢測(cè)18-20
• 2.2 CoxA16-IgG制備及檢測(cè)20-22
• 2.3 HRP標(biāo)記CoxA16-IgG及檢測(cè)22-23
• 2.4 ELISA檢測(cè)體系的建立23-24
• 2.5 參比品的制備24-26
• 2.6 檢測(cè)試劑主要技術(shù)指標(biāo)驗(yàn)證26
• 2.7 應(yīng)用26-28
• 結(jié)果與分析28-44
• 1 抗CoxA16血清相關(guān)檢測(cè)28-29
• 1.1 兔抗CoxA16血清中和抗體效價(jià)28-29
• 1.2 交叉吸收實(shí)驗(yàn)29
• 2 CoxA16-IgG相關(guān)檢測(cè)29-30
• 2.1 純度檢測(cè)29
• 2.2 蛋白含量檢測(cè)29-30
• 3 酶標(biāo)抗體檢測(cè)30-31
• 3.1 酶標(biāo)抗體定量檢測(cè)30-31
• 3.2 酶標(biāo)抗體效價(jià)31
• 4 反應(yīng)條件的選擇31-35
• 4.1 包被濃度和酶標(biāo)抗體濃度優(yōu)化31-32
• 4.2 包被液與封閉液的優(yōu)化32-33
• 4.3 封閉條件優(yōu)化33-34
• 4.4 樣品孵育時(shí)間與酶標(biāo)抗體孵育時(shí)間的優(yōu)化34
• 4.5 底物的選擇34-35
• 4.6 底物反應(yīng)條件優(yōu)化35
• 5 標(biāo)準(zhǔn)品的制備35-39
• 5.1 靈敏度參比品35-36
• 5.2 精密性參比品36
• 5.3 特異性參比品36-37
• 5.4 定量參比品37-39
• 6 ELISA體系評(píng)價(jià)39-41
• 6.1 檢測(cè)下限、線性和直線性39-41
• 6.2 靈敏度、特異性、精密度及穩(wěn)定性驗(yàn)證41
• 7 應(yīng)用41-44
• 7.1 CoxA16滅活疫苗工藝研究的應(yīng)用41-42
• 7.2 與熒光PCR法、中和法結(jié)果比較42-44
• 討論44-49
• 1 高效價(jià)抗體的制備44-45
• 2 ELISA檢測(cè)體系的建立45-46
• 3 參考品的制備46-47
• 4 體系的標(biāo)化47
• 5 應(yīng)用47
• 6 展望47-49
• 小結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 附錄 主要縮略詞表53-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55-56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 舒建癡,唐耀武,王德生,朱紅,劉海林,曹逸云,陽(yáng)選祥,薛桂玲,鄭新華,陸桂秋;北京發(fā)現(xiàn)由CoxA_(16)病毒引致的一次手足口病[J];北京醫(yī)學(xué);1986年04期

2 賈蕾;趙成松;張莉;李爽;張代濤;劉白薇;王全意;黎新宇;;腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型感染的手足口病患兒的相關(guān)特征對(duì)比研究[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2011年08期

3 楊曉紅;吳茜;溫柏平;代宏劍;莊宇;楊俊逸;;2010年昆明地區(qū)兒童手足口病的流行特征[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2012年03期

4 王娟;羅珍;范東瀛;高娜;朱俊萍;安靜;;2007-2008年北京地區(qū)CA16VP1區(qū)系統(tǒng)進(jìn)化分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年23期

5 廖英;謝鴻恩;;手足口病病原學(xué)檢測(cè)及臨床特點(diǎn)相關(guān)性研究[J];吉林醫(yī)學(xué);2010年24期

6 劉少凡;馮玨孫;;SPA結(jié)合HSV免疫血清交叉吸收抗原后對(duì)抗體分型的初步探討[J];湖北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1988年02期

7 龍潤(rùn)?quán)l(xiāng);謝忠平;楊蓉;李華;白惠株;董承紅;劉龍丁;李琦涵;;EV71抗原BA-ELISA檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2009年12期

8 馬紹輝;陳俊英;李華;楊卉娟;施海晶;潘s，

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