本文關(guān)鍵詞：GABA_BR在細(xì)胞膜上的運(yùn)動(dòng)機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： GABABR 脂筏 內(nèi)化 AP2 NMDA 棕櫚酰化修飾

【摘要】：γ－氨基丁酸B受體(gamma aminobutyric acid receptor type B，GABABR)屬于C族G蛋白偶聯(lián)受體，其配體是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ－氨基丁酸（GABA）。GABABR通過GABAB1和GABAB2兩個(gè)亞基形成的異源二聚體行使功能。該受體廣泛分布于哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周神經(jīng)系統(tǒng)中，能夠介導(dǎo)長(zhǎng)時(shí)程突觸抑制。 前期研究表明，GABABR在靜息狀態(tài)下定位在脂筏中，GABAB2亞基C末端上的棕櫚酰化修飾在其中發(fā)揮重要作用；GABABR激活后轉(zhuǎn)運(yùn)出脂筏。受體在脂筏內(nèi)外的定位對(duì)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率有重要影響。那么GABABR的棕櫚酰化修飾是否受受體活性狀態(tài)的動(dòng)態(tài)調(diào)控，棕櫚酰化修飾能否通過與其他翻譯后修飾機(jī)制的相互作用影響出脂筏后受體的命運(yùn)，迄今為止還沒有相關(guān)研究。 本文以過表達(dá)的HEK293細(xì)胞和原代培養(yǎng)的小鼠小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞作為模式細(xì)胞，，通過酰基生物素交換（ABE）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞在靜息狀態(tài)下，GABAB2亞基可發(fā)生棕櫚酰修飾可促使GABABR定位在脂筏中，當(dāng)GABABR被激活后，GABAB2亞基的棕櫚酰修飾水平顯著降低使受體移出脂筏。將GABAB2亞基C末端的Cys874位點(diǎn)突變成Ala可明顯降低受體的棕櫚酰修飾水平，提示該位點(diǎn)為棕櫚酰修飾位點(diǎn)并且能夠促進(jìn)GABABR定位在脂筏中。進(jìn)一步通過序列分析和免疫熒光結(jié)果表明，在GABAB2亞基C末端上與棕櫚�；揎椢稽c(diǎn)Cys874相鄰的830-831-832-833（YQEL）序列是網(wǎng)格蛋白接頭因子AP2的識(shí)別位點(diǎn)，將該序列全部突變成Ala后，可顯著性的抑制受體的組成性內(nèi)化。最后通過GABAB1a和GABAB2亞基C-末端純化蛋白的體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明，GABAB2亞基的YQEL序列可與Src相互作用，提示Src可能通過磷酸化該序列中的Tyr殘基調(diào)節(jié)GABABR的組成性內(nèi)化，以上結(jié)果為研究GABABR在細(xì)胞膜上的運(yùn)動(dòng)機(jī)制提供了新依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：GABABR 脂筏 內(nèi)化 AP2 NMDA 棕櫚�；揎�
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3411
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 緒論8-24
• 1.1 棕櫚�；{(diào)控蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)研究8-12
• 1.2 GABABR 內(nèi)化的研究12-18
• 1.3 GABABR 的側(cè)向運(yùn)動(dòng)與棕櫚酰化18-20
• 1.4 本課題研究?jī)?nèi)容、目的及意義20-24
• 2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理24-27
• 2.1 小腦顆粒細(xì)胞神經(jīng)元的培養(yǎng)24
• 2.2 電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)（Electroporation）24
• 2.3 �；�-生物素交換法（Acyl-biotinyl Exchange， ABE）24-25
• 2.4 GST-Pulldown glutathione S-transferase pulldown25
• 2.5 基于抗原抗體的免疫熒光實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.6 免疫印跡（Western Blotting）26-27
• 3 實(shí)驗(yàn)材料與方法27-36
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法27-36
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論36-48
• 4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-44
• 4.2 討論與展望44-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54

【相似文獻(xiàn)】

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2 本期主講人:江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室教授 江波;天然伽馬氨基丁酸(GABA)應(yīng)用前景廣闊[N];中國(guó)食品報(bào);2009年

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10 主講人:江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室教授 江波;天然伽馬氨基丁酸的分布及制備[N];中國(guó)食品報(bào);2009年

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本文編號(hào)：1018746