本文關(guān)鍵詞：GABA_BR在細(xì)胞膜上的運動機制研究

  更多相關(guān)文章： GABABR 脂筏 內(nèi)化 AP2 NMDA 棕櫚�；揎�

【摘要】：γ－氨基丁酸B受體(gamma aminobutyric acid receptor type B，GABABR)屬于C族G蛋白偶聯(lián)受體，其配體是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ－氨基丁酸（GABA）。GABABR通過GABAB1和GABAB2兩個亞基形成的異源二聚體行使功能。該受體廣泛分布于哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周神經(jīng)系統(tǒng)中，能夠介導(dǎo)長時程突觸抑制。 前期研究表明，GABABR在靜息狀態(tài)下定位在脂筏中，GABAB2亞基C末端上的棕櫚�；揎椩谄渲邪l(fā)揮重要作用；GABABR激活后轉(zhuǎn)運出脂筏。受體在脂筏內(nèi)外的定位對其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)效率有重要影響。那么GABABR的棕櫚�；揎検欠袷苁荏w活性狀態(tài)的動態(tài)調(diào)控，棕櫚�；揎椖芊裢ㄟ^與其他翻譯后修飾機制的相互作用影響出脂筏后受體的命運，迄今為止還沒有相關(guān)研究。 本文以過表達(dá)的HEK293細(xì)胞和原代培養(yǎng)的小鼠小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞作為模式細(xì)胞，，通過酰基生物素交換（ABE）實驗發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞在靜息狀態(tài)下，GABAB2亞基可發(fā)生棕櫚酰修飾可促使GABABR定位在脂筏中，當(dāng)GABABR被激活后，GABAB2亞基的棕櫚酰修飾水平顯著降低使受體移出脂筏。將GABAB2亞基C末端的Cys874位點突變成Ala可明顯降低受體的棕櫚酰修飾水平，提示該位點為棕櫚酰修飾位點并且能夠促進(jìn)GABABR定位在脂筏中。進(jìn)一步通過序列分析和免疫熒光結(jié)果表明，在GABAB2亞基C末端上與棕櫚酰化修飾位點Cys874相鄰的830-831-832-833（YQEL）序列是網(wǎng)格蛋白接頭因子AP2的識別位點，將該序列全部突變成Ala后，可顯著性的抑制受體的組成性內(nèi)化。最后通過GABAB1a和GABAB2亞基C-末端純化蛋白的體外結(jié)合實驗表明，GABAB2亞基的YQEL序列可與Src相互作用，提示Src可能通過磷酸化該序列中的Tyr殘基調(diào)節(jié)GABABR的組成性內(nèi)化，以上結(jié)果為研究GABABR在細(xì)胞膜上的運動機制提供了新依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：GABABR 脂筏 內(nèi)化 AP2 NMDA 棕櫚�；揎�
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 緒論8-24
• 1.1 棕櫚�；{(diào)控蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運研究8-12
• 1.2 GABABR 內(nèi)化的研究12-18
• 1.3 GABABR 的側(cè)向運動與棕櫚酰化18-20
• 1.4 本課題研究內(nèi)容、目的及意義20-24
• 2 實驗技術(shù)原理24-27
• 2.1 小腦顆粒細(xì)胞神經(jīng)元的培養(yǎng)24
• 2.2 電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)（Electroporation）24
• 2.3 �；�-生物素交換法（Acyl-biotinyl Exchange， ABE）24-25
• 2.4 GST-Pulldown glutathione S-transferase pulldown25
• 2.5 基于抗原抗體的免疫熒光實驗25-26
• 2.6 免疫印跡（Western Blotting）26-27
• 3 實驗材料與方法27-36
• 3.1 實驗材料27
• 3.2 實驗方法27-36
• 4 實驗結(jié)果與討論36-48
• 4.1 實驗結(jié)果36-44
• 4.2 討論與展望44-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54

【相似文獻(xiàn)】

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2 本期主講人:江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室教授 江波;天然伽馬氨基丁酸(GABA)應(yīng)用前景廣闊[N];中國食品報;2009年

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7 記者 田學(xué)科;科學(xué)家揭示NhaA膜蛋白結(jié)構(gòu)[N];科技日報;2005年

8 曹麗君;用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可治療神經(jīng)痛[N];新華每日電訊;2005年

9 白毅;局部水內(nèi)流調(diào)控細(xì)胞膜伸展突起[N];中國醫(yī)藥報;2005年

10 主講人:江南大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室教授 江波;天然伽馬氨基丁酸的分布及制備[N];中國食品報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：1018746