本文關(guān)鍵詞：THAP11與ABRO1相互作用及其介導(dǎo)的生物學(xué)功能研究

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【摘要】：蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮生物學(xué)功能的重要基礎(chǔ)，研究蛋白質(zhì)相互作用可以提供目標(biāo)蛋白質(zhì)的功能線索，還可望揭示蛋白質(zhì)的分子作用機(jī)制。THAP11是THAP蛋白家族的成員之一，是一種鋅離子依賴的轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞凋亡、增殖調(diào)控，但其功能和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。ABRO1(Abraxas Brother1)也被稱為KIAA0157或者FAM175B，作為支架蛋白能夠介導(dǎo)BRISC去泛素化酶復(fù)合體的形成，是該復(fù)合體發(fā)揮去泛素化酶催化活性所必需的成分。此外，ABRO1能與THAP5、AP-1蛋白家族結(jié)合，參與細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)。目前，對ABRO1的研究還處于起步階段，其功能和作用機(jī)制尚待深入研究。 為深入研究這兩種蛋白質(zhì)及其介導(dǎo)的生物學(xué)功能，我們以其相互作用為切入點(diǎn)，首先利用免疫沉淀技術(shù)，確定了THAP11與ABRO1存在相互作用，并鑒定了介導(dǎo)相互作用的結(jié)構(gòu)域，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)ABRO1在正常條件下主要分布于細(xì)胞質(zhì)，少量分布于細(xì)胞核，與THAP11存在弱的共定位，但在DNA損傷時ABRO1能夠入核并與THAP11形成明顯的共定位。DNA損傷明顯上調(diào)ABRO1和THAP11的表達(dá)，這個過程不依賴于p53。本實驗室研究發(fā)現(xiàn)ABRO1是一種重要的DNA損傷反應(yīng)調(diào)控基因（未發(fā)表結(jié)果），提示THAP11可能參與DNA損傷調(diào)控。為證明這個假設(shè)，我們檢測了正常情況和DNA損傷時THAP11對細(xì)胞周期和凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)THAP11能促進(jìn)細(xì)胞凋亡，，使細(xì)胞G2期發(fā)生阻滯，DNA損傷時，G0/G1期發(fā)生阻滯，過表達(dá)THAP11使G0/G1期阻滯更加明顯。 我們實驗室前期的研究發(fā)現(xiàn)ABRO能與p53相互作用并增強(qiáng)p53蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性�；赥HAP11能與ABRO1相互作用且參與細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)調(diào)節(jié)，我們檢測了THAP11與p53的相互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)THAP11確能與p53發(fā)生相互作用，并通過抑制p53的泛素化修飾穩(wěn)定p53蛋白。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灠l(fā)現(xiàn)THAP11對p53下游靶基因MDM2和p21的轉(zhuǎn)錄活性有影響。 本論文通過研究THAP11和ABRO1的相互作用，揭示THAP11是一種新的p53調(diào)控分子并參與DNA損傷調(diào)節(jié)。深入研究ABRO1、p53在THAP11調(diào)控DNA損傷中的作用，及THAP11、ABRO1、p53三者的相互作用關(guān)系如是否形成蛋白質(zhì)復(fù)合體將有利于揭示細(xì)胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生發(fā)展等的新機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：THAP11 ABRO1 p53 蛋白質(zhì)相互作用 DNA損傷
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R3411;O629.73
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第一章 文獻(xiàn)綜述9-21
• 1.1 THAP 蛋白9-10
• 1.2 THAP11 蛋白10-12
• 1.3 ABRO1 蛋白12-17
• 1.3.1 ABRO1 蛋白結(jié)構(gòu)特點(diǎn)13
• 1.3.2 ABRO1 調(diào)控 BRCC36 復(fù)合體 K-63 特異性去泛素化酶活性13-14
• 1.3.3 ABRO1 參與 BRISC-SHMT 復(fù)合體調(diào)控干擾素應(yīng)答14-15
• 1.3.4 ABRO1 參與細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)15
• 1.3.5 ABRO1 參與抗心肌缺血15
• 1.3.6 ABRO1 調(diào)控 p53 穩(wěn)定性15-16
• 1.3.7 ABRO1 與疾病16-17
• 1.4 蛋白質(zhì)相互作用17-19
• 1.5 本課題研究意義19-21
• 第二章 實驗材料與方法21-32
• 2.1 細(xì)胞株、菌株和質(zhì)粒21
• 2.2 試劑和試劑盒21-22
• 2.3 主要設(shè)備22-24
• 2.4 常用試劑配制24-25
• 2.4.1 細(xì)菌相關(guān)溶液24
• 2.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)溶液24
• 2.4.3 Western Blot 相關(guān)溶液24-25
• 2.4.4 細(xì)胞裂解和免疫沉淀相關(guān)溶液25
• 2.5 實驗方法25-32
• 2.5.1 質(zhì)粒提取25
• 2.5.2 細(xì)胞總蛋白提取25-26
• 2.5.3 哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染26
• 2.5.4 Western Blot26-27
• 2.5.5 RT-PCR27
• 2.5.6 熒光定量 PCR27
• 2.5.7 熒光素酶報告基因?qū)嶒?/span>27-28
• 2.5.8 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）28
• 2.5.9 GST-pull down28
• 2.5.10 體內(nèi)泛素化28-29
• 2.5.11 間接免疫熒光29
• 2.5.12 慢病毒的包裝與濃縮29-30
• 2.5.13 慢病毒感染 HepG2 細(xì)胞30
• 2.5.14 細(xì)胞周期檢測30
• 2.5.15 細(xì)胞凋亡檢測30
• 2.5.16 生物信息學(xué)預(yù)測 p53 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)30-31
• 2.5.17 統(tǒng)計分析31-32
• 第三章 實驗結(jié)果與討論32-55
• 3.1 實驗結(jié)果32-51
• 3.1.1 ABRO1 和 THAP11 存在外源相互作用32-33
• 3.1.2 ABRO1 與 THAP11 存在內(nèi)源相互作用33
• 3.1.3 ABRO1 與 THAP11 直接相互作用33-34
• 3.1.4 ABRO1 與 THAP11 相互作用結(jié)構(gòu)域的確定34-36
• 3.1.5 DNA 損傷誘導(dǎo) THAP11 入核，形成與 ABRO1 的共定位36-37
• 3.1.6 DNA 損傷誘導(dǎo) ABRO1 和 THAP11 蛋白水平表達(dá)上調(diào)37-38
• 3.1.7 DNA 損傷上調(diào) ABRO1、THAP11 蛋白表達(dá)不依賴于 p5338
• 3.1.8 THAP11 慢病毒包裝以及 THAP11 細(xì)胞穩(wěn)定株的構(gòu)建38-41
• 3.1.9 THAP11 對細(xì)胞周期的影響41-44
• 3.1.10 過表達(dá) THAP11 促進(jìn)細(xì)胞凋亡44-45
• 3.1.11 THAP11 與 p53 存在相互作用45-46
• 3.1.12 預(yù)測 THAP11 啟動子區(qū)域的 p53 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)46-47
• 3.1.13 THAP11 對 p53 及其下游靶基因轉(zhuǎn)錄活性影響47-49
• 3.1.14 THAP11 和 p53 在蛋白水平的調(diào)控49
• 3.1.15 THAP11 能增強(qiáng) p53 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性49-50
• 3.1.16 THAP11 通過抑制 p53 泛素化穩(wěn)定 p53 蛋白50-51
• 3.2 討論51-55
• 第四章 結(jié)論與展望55-56
• 4.1 結(jié)論55
• 4.2 展望55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 附錄63-65
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明65-66
• 致謝66

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐婧;THAP11與ABRO1相互作用及其介導(dǎo)的生物學(xué)功能研究[D];天津大學(xué);2014年

2 李揚(yáng);THAP11作為多聚谷氨酰胺疾病候選致病基因及候選抑癌基因的功能研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

3 楊帆;多聚谷氨酰胺疾病候選致病基因THAP11功能的初步研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號：1018617