本文關(guān)鍵詞：不同濃度擬康氏木霉多糖對臍血來源DC成熟及免疫活性的影響

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【摘要】：目的：（1）觀察不同濃度擬康氏木霉多糖對DC成熟性分化的影響； （2）觀察不同濃度擬康氏木霉多糖誘導(dǎo)成熟的DC刺激同種異體T細(xì)胞增殖活性的影響； （3）觀察不同濃度擬康氏木霉多糖誘導(dǎo)的成熟DC分泌細(xì)胞因子IL-12、TNF-α活性的影響。 方法（：1）采集5例健康足月孕婦臍帶血分離單個核細(xì)胞，在細(xì)胞因子IL-4、GM-CSF的刺激下培養(yǎng)未成熟DC(immature DC，，imDC)； （2）用不同濃度（50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml）擬康氏木霉多糖分別誘導(dǎo)imDC繼續(xù)分化，采用流式細(xì)胞術(shù)分析不同處理的各組DC的髓系標(biāo)記CD11c及其表面成熟性相關(guān)分子CD83、CD80、HLA-DR的變化； （3）采集健康成人外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，用尼龍毛柱分離得到純化的T淋巴細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞；將上述不同濃度的擬康氏木霉多糖誘導(dǎo)產(chǎn)生的DC作為刺激細(xì)胞，混合培養(yǎng)72h，MTT法檢測并計(jì)算細(xì)胞刺激指數(shù)，比較組間DC刺激T淋巴細(xì)胞增殖的活性。 （4）在4、8、16、24、48小時分別收集不同處理的各組DC上清液，ELISA法檢測IL-12和TNF-α分泌水平的變化。 結(jié)果：（1）臍血單個核細(xì)胞能在GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)下分化為imDC；脂多糖（LPS）能夠誘導(dǎo)DC成熟，其表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表達(dá)均增加，細(xì)胞具有典型的DC形態(tài)； （2）流式細(xì)胞儀檢測各組DC表型結(jié)果顯示：與誘導(dǎo)前比較：50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表達(dá)均明顯增高(p0.05，p0.05，p0.05)；與LPS誘導(dǎo)組比較：50μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC表面成熟性分子CD83的表達(dá)無明顯變化（p0.05）；HLA-DR、CD80的表達(dá)較低（p0.05，p0.05）。100μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80的表達(dá)均無明顯變化（p0.05，p0.05）；CD83的表達(dá)明顯升高（p0.05）。200μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表達(dá)均無明顯變化（p0.05，p0.05，p0.05）。 （3）各組誘導(dǎo)的成熟DC刺激T淋巴細(xì)胞增殖活性結(jié)果顯示：與空白對照組比較：50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC刺激T細(xì)胞增殖能力均顯著增強(qiáng)(p0.05，p0.05，p0.05)。與LPS誘導(dǎo)組比較：100μg/ml、200μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC刺激T細(xì)胞增殖能力均無明顯變化（p0.05）；50μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC刺激同種異體T細(xì)胞增殖能力較低（p0.05）。 （4）各組作用48h的DC上清IL-12、TNF-α濃度比較結(jié)果顯示：與LPS組比較：100μg/ml、200μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC分泌的細(xì)胞因子IL-12、TNF-α在上清液中的濃度沒有顯著變化（p0.05，p0.05）。50μg/ml多糖組誘導(dǎo)的DC分泌的細(xì)胞因子IL-12、TNF-α的濃度明顯較低（p0.05）。取100μg/ml多糖組與LPS組按不同時間收集的DC上清，繼續(xù)觀察兩組分泌的細(xì)胞因子TNF-α的時效關(guān)系。結(jié)果表明，LPS組誘導(dǎo)的成熟DC分泌細(xì)胞因子TNF-α?xí)r間較早，在8h左右達(dá)到頂峰；而后緩慢下降。而100μg/ml多糖組誘導(dǎo)的成熟DC分泌細(xì)胞因子TNF-α?xí)r間較遲，呈緩慢升高，至24h左右到達(dá)頂峰。 結(jié)論：（1）擬康氏木霉多糖能刺激人臍血來源DC成熟，以濃度為100μg/ml的多糖刺激效果最為顯著； （2）擬康氏木霉多糖刺激成熟的DC具有誘導(dǎo)同種異體的T細(xì)胞增殖的能力； （3）擬康氏木霉多糖刺激成熟的DC具有分泌細(xì)胞因子IL-12、TNF-α活性，其分泌細(xì)胞因子TNF-α的活性24h左右到達(dá)峰值，且呈時間依賴性。
【關(guān)鍵詞】：擬康氏木霉多糖 樹突狀細(xì)胞 免疫表型 細(xì)胞增殖 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-28
• 討論28-33
• 結(jié)論33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述38-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李麗華;喻麗珍;趙志剛;王國棟;;擬康氏木霉胞外總多糖免疫活性研究[J];赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年07期

2 歐陽天贄;李小定;榮建華;;真菌多糖抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2006年03期

本文編號：996970