本文關(guān)鍵詞：不同濃度擬康氏木霉多糖對臍血來源DC成熟及免疫活性的影響

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【摘要】：目的：（1）觀察不同濃度擬康氏木霉多糖對DC成熟性分化的影響； （2）觀察不同濃度擬康氏木霉多糖誘導成熟的DC刺激同種異體T細胞增殖活性的影響； （3）觀察不同濃度擬康氏木霉多糖誘導的成熟DC分泌細胞因子IL-12、TNF-α活性的影響。 方法（：1）采集5例健康足月孕婦臍帶血分離單個核細胞，在細胞因子IL-4、GM-CSF的刺激下培養(yǎng)未成熟DC(immature DC，，imDC)； （2）用不同濃度（50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml）擬康氏木霉多糖分別誘導imDC繼續(xù)分化，采用流式細胞術(shù)分析不同處理的各組DC的髓系標記CD11c及其表面成熟性相關(guān)分子CD83、CD80、HLA-DR的變化； （3）采集健康成人外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，用尼龍毛柱分離得到純化的T淋巴細胞作為反應細胞；將上述不同濃度的擬康氏木霉多糖誘導產(chǎn)生的DC作為刺激細胞，混合培養(yǎng)72h，MTT法檢測并計算細胞刺激指數(shù)，比較組間DC刺激T淋巴細胞增殖的活性。 （4）在4、8、16、24、48小時分別收集不同處理的各組DC上清液，ELISA法檢測IL-12和TNF-α分泌水平的變化。 結(jié)果：（1）臍血單個核細胞能在GM-CSF、IL-4誘導下分化為imDC；脂多糖（LPS）能夠誘導DC成熟，其表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表達均增加，細胞具有典型的DC形態(tài)； （2）流式細胞儀檢測各組DC表型結(jié)果顯示：與誘導前比較：50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml多糖組誘導的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表達均明顯增高(p0.05，p0.05，p0.05)；與LPS誘導組比較：50μg/ml多糖組誘導的DC表面成熟性分子CD83的表達無明顯變化（p0.05）；HLA-DR、CD80的表達較低（p0.05，p0.05）。100μg/ml多糖組誘導的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80的表達均無明顯變化（p0.05，p0.05）；CD83的表達明顯升高（p0.05）。200μg/ml多糖組誘導的DC表面成熟性分子HLA-DR、CD80和CD83的表達均無明顯變化（p0.05，p0.05，p0.05）。 （3）各組誘導的成熟DC刺激T淋巴細胞增殖活性結(jié)果顯示：與空白對照組比較：50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml多糖組誘導的DC刺激T細胞增殖能力均顯著增強(p0.05，p0.05，p0.05)。與LPS誘導組比較：100μg/ml、200μg/ml多糖組誘導的DC刺激T細胞增殖能力均無明顯變化（p0.05）；50μg/ml多糖組誘導的DC刺激同種異體T細胞增殖能力較低（p0.05）。 （4）各組作用48h的DC上清IL-12、TNF-α濃度比較結(jié)果顯示：與LPS組比較：100μg/ml、200μg/ml多糖組誘導的DC分泌的細胞因子IL-12、TNF-α在上清液中的濃度沒有顯著變化（p0.05，p0.05）。50μg/ml多糖組誘導的DC分泌的細胞因子IL-12、TNF-α的濃度明顯較低（p0.05）。取100μg/ml多糖組與LPS組按不同時間收集的DC上清，繼續(xù)觀察兩組分泌的細胞因子TNF-α的時效關(guān)系。結(jié)果表明，LPS組誘導的成熟DC分泌細胞因子TNF-α時間較早，在8h左右達到頂峰；而后緩慢下降。而100μg/ml多糖組誘導的成熟DC分泌細胞因子TNF-α時間較遲，呈緩慢升高，至24h左右到達頂峰。 結(jié)論：（1）擬康氏木霉多糖能刺激人臍血來源DC成熟，以濃度為100μg/ml的多糖刺激效果最為顯著； （2）擬康氏木霉多糖刺激成熟的DC具有誘導同種異體的T細胞增殖的能力； （3）擬康氏木霉多糖刺激成熟的DC具有分泌細胞因子IL-12、TNF-α活性，其分泌細胞因子TNF-α的活性24h左右到達峰值，且呈時間依賴性。
【關(guān)鍵詞】：擬康氏木霉多糖 樹突狀細胞 免疫表型 細胞增殖 細胞因子
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-28
• 討論28-33
• 結(jié)論33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻35-38
• 綜述38-55
• 參考文獻51-55
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李麗華;喻麗珍;趙志剛;王國棟;;擬康氏木霉胞外總多糖免疫活性研究[J];赤峰學院學報(自然科學版);2013年07期

2 歐陽天贄;李小定;榮建華;;真菌多糖抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究進展[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2006年03期

本文編號：996970