本文關鍵詞：GRASP55和GRASP65在介導高爾基體堆疊形成中的功能

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【摘要】：高爾基體在哺乳動物細胞中呈現(xiàn)層層堆疊的形態(tài),參與這種堆疊形成的蛋白有GRASP55和GRASP65兩種蛋白。GRASP蛋白由N末端的GRASP結構域和C末端的尾巴組成。GRASP結構域包括兩個串聯(lián)的PDZ結構域,其對于高爾基體膜的拴連是必須的。但是GRASP蛋白介導高爾基體膜栓連的具體分子機制并不是很清楚。我們通過已知的GRASP蛋白的結構信息,在PDZ2-PDZ2和PDZ1-CT交界面推測了幾個關鍵的氨基酸位點,并在哺乳動物細胞中檢測了這些位點的功能。我們得到了與體外實驗相一致的結果,并根據(jù)這些結果提出了GRASP蛋白介導膜栓連的一種新的模型,這為探究高爾基體膜堆疊的機制提供了新的思路。
【關鍵詞】：高爾基體 GRASP蛋白 膜拴連
【學位授予單位】：南開大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第一章 前言9-23
• 第一節(jié) 高爾基體的結構和功能9-11
• 第二節(jié) 哺乳動物細胞高爾基體發(fā)生的分子機制11-14
• 1.2.1 裂期高爾基體解聚的重要生物學意義12-13
• 1.2.2 高爾基體解聚的分子機制13-14
• 第三節(jié) GRASP蛋白在高爾基體形態(tài)調控中的作用14-23
• 1.3.1 GRASP的結構14-16
• 1.3.2 GRASPs與高爾基體層囊堆疊16-18
• 1.3.3 在有絲分裂期GRASP蛋白以及高爾基體形態(tài)的調節(jié)18-23
• 第二章 材料與方法23-36
• 第一節(jié) 試劑、儀器、配方23-29
• 第二節(jié) 實驗方法29-36
• 2.2.1 質粒構建29-31
• 2.2.2 大腸桿菌質粒小量抽提31
• 2.2.3 大腸桿菌質粒中量提取31
• 2.2.4 大腸桿菌感受態(tài)細胞制備與轉化31-32
• 2.2.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳32-33
• 2.2.6 蛋白質印跡33-34
• 2.2.7 BFA敏感性試驗34
• 2.2.8 免疫熒光染色34-36
• 第三章 結果分析36-49
• 第一節(jié) 在細胞水平檢測GRASP蛋白介導的膜拴連36-46
• 3.1.1 GRASP蛋白的PDZ2-PDZ2之間的相互作用38-40
• 3.1.2 GRASP蛋白的PDZ1-CT之間的相互作用40-46
• 第二節(jié) 誘導表達細胞系的構建46-49
• 第四章 討論49-52
• 參考文獻52-57
• 致謝57-58
• 個人簡歷58

【共引文獻】

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本文編號：994738