本文關(guān)鍵詞：B群腦膜炎球菌重組LTB-NspA融合蛋白疫苗免疫活性及保護(hù)作用的初步研究

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【摘要】：目的：構(gòu)建LTB-NspA重組蛋白疫苗，經(jīng)腹腔注射途徑免疫BALB/c雌性小鼠，探討?zhàn)つっ庖咦魟㎜TB是否能夠增強(qiáng)疫苗抗原NspA的體液免疫（尤其是黏膜免疫）及細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，初步評(píng)價(jià)LTB-NspA重組蛋白疫苗對(duì)小鼠的免疫保護(hù)作用，為研制有效抗B群腦膜炎奈瑟菌的蛋白疫苗提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：分別以大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H44815基因組和B群腦膜炎奈瑟菌標(biāo)準(zhǔn)株MC58基因組為模板，運(yùn)用PCR及重疊延伸PCR技術(shù)，構(gòu)建原核重組表達(dá)載體pET-30a/ltb、pET-30a/nspa和pET-30a/ltb-nspa，大量表達(dá)重組蛋白，經(jīng)His親和層析純化柱咪唑濃度梯度洗脫，收集重組蛋白，蛋白印跡法（Western blot）鑒定其抗原性；腹腔注射途徑免疫BALB/c雌性小鼠，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)蛋白疫苗免疫后的小鼠血清中抗NspA的IgG及其亞類抗體水平、小鼠生殖道黏膜分泌液中抗NspA的SIgA抗體水平及小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-4、IFN-γ水平，CCK8法檢測(cè)小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)；計(jì)算LTB-NspA重組蛋白疫苗對(duì)BALB/c雌性小鼠的免疫保護(hù)率。 結(jié)果：經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定，成功構(gòu)建了三個(gè)原核表達(dá)載體：pET-30a/ltb、pET-30a/nspa和pET-30a/ltb-nspa；分別優(yōu)化重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)條件后，重組蛋白均能在上清中以可溶性狀態(tài)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物采用His樹脂純化后經(jīng)Western-blot鑒定，證實(shí)目的蛋白的存在；腹腔注射途徑免疫BALB/c雌性小鼠，LTB-NspA組血清特異性IgG及IgG1、IgG2a、IgG3和生殖道黏膜產(chǎn)生的特異性SIgA隨免疫時(shí)間均呈上升趨勢(shì)，IgG2b在第4周達(dá)峰值：LTB-NspA組IgG、IgG2a水平明顯高于NspA組(P0.05)；LTB-NspA組IgG1水平在6w時(shí)明顯高于NspA組(P0.05)；LTB-NspA組IgG2b水平2w、4w時(shí)明顯高于NspA組(P0.05)；LTB-NspA組IgG3、SIgA水平在4w、6w時(shí)明顯高于NspA組(P0.05)；而對(duì)照組PBS組和LTB組間抗體水平無(wú)顯著性差異(P0.05)。 LTB-NspA組IgG2a/IgG1的比值，在免疫的2w、4w、6w時(shí)分別為0.808、0.840和0.943，比值均小于1；LTB-NspA組IL-4含量（204.778±18.936）pg/mL明顯高于NspA組(146.896±13.281) pg/mL (P0.05)，，LTB-NspA組IFN-γ含量（129.210±18.621）pg/mL明顯高于NspA組(65.428±14.326) pg/mL (P0.05)； LTB-NspA組和NspA組的脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)（SI）明顯高于PBS組和LTB組（P0.05），兩蛋白組間SI無(wú)明顯差異(P0.05)；LTB-NspA組小鼠免疫血清補(bǔ)體介導(dǎo)的體外殺菌效價(jià)（6w）達(dá)1：64；小鼠感染MC58后72h，LTB-NspA組小鼠的存活率（90%）高于NspA組小鼠的存活率（70%），而PBS組和LTB組的存活率為0。 結(jié)論：1.LTB-NspA蛋白疫苗能夠誘生較高水平的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫，且以Th2傾向性體液免疫應(yīng)答為主；黏膜免疫佐劑LTB可有效提高NspA基因誘導(dǎo)的特異性黏膜免疫應(yīng)答水平及血清IgG抗體水平；2.LTB-NspA蛋白疫苗對(duì)感染B群腦膜炎奈瑟菌的BALB/c小鼠具有良好的免疫保護(hù)效果。
【關(guān)鍵詞】：B群腦膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A 大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位 蛋白疫苗 免疫活性 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R378
【目錄】：

• 英文縮略語(yǔ)索引4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-12
• 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-30
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-44
• 討論44-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 附錄51-54
• 文獻(xiàn)綜述54-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 發(fā)表及待發(fā)表論文61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 鄭繼平,劉向昕,王令春,李淑琴,方門忠,張兆山;產(chǎn)腸毒素大腸桿菌混合載體疫苗的免疫原性評(píng)價(jià)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2004年06期

2 邵祝軍;徐麗;高源;李馬超;李藝星;尹遵棟;梁曉峰;;中國(guó)流行性腦脊髓膜炎流行菌群變化趨勢(shì)分析[J];中國(guó)計(jì)劃免疫;2007年06期

本文編號(hào)：985850