本文關(guān)鍵詞：成骨細(xì)胞應(yīng)力學(xué)效應(yīng)中Notch信號(hào)及其關(guān)鍵因子APH1作用機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 流體剪切力 MC3T3-E1細(xì)胞 Notch信號(hào)通路 骨橋蛋白(OPN) 一氧化氮(NO)

【摘要】：背景： 應(yīng)力在骨改建過程中起重要作用,流體剪切力對(duì)成骨細(xì)胞的作用機(jī)制一直是該研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。Notch作為參與骨細(xì)胞分化的關(guān)鍵信號(hào)通路,其關(guān)于應(yīng)力作用下骨改建中的作用機(jī)制研究較少。前期實(shí)驗(yàn)對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞施加流體剪切力后全基因組基因芯片分析發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)通路APH1因子表達(dá)明顯增強(qiáng),提示Notch信號(hào)在成骨細(xì)胞對(duì)應(yīng)力反應(yīng)的信號(hào)調(diào)控中起重要作用。對(duì)Notch通路作用機(jī)制的進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)Notch受體的機(jī)械敏感性參與信號(hào)通路的活化。因此,深入研究Notch通路在應(yīng)力對(duì)骨代謝作用中的調(diào)控機(jī)理,可以為組織工程、提高骨創(chuàng)傷修復(fù)質(zhì)量、相關(guān)骨疾病治療及外源性基因治療成為可能提供理論依據(jù)。 目的： 本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上通過抑制Notch信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子APHl,結(jié)合MTT、ALP、Western blot以及NO測(cè)定,探討Notch信號(hào)在成骨細(xì)胞應(yīng)力學(xué)效應(yīng)中的作用機(jī)制,進(jìn)一步明確在應(yīng)力促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化過程中Notch信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子的作用及地位。 方法： 1.體外培養(yǎng)小鼠MC3T3-E1細(xì)胞,通過平行板流室加力系統(tǒng)構(gòu)建MC3T3-E1細(xì)胞力學(xué)刺激模型。 實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組,單因素力組(0.12mN·cm-2的流體剪切力1h),單因素Notch信號(hào)抑制劑組(10μmol/ml DAPT)以及雙因素組(同時(shí)加力和抑制劑)。 2.應(yīng)用MTT法和ALP法來分別檢測(cè)四組細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)處理后的增殖能力及細(xì)胞分化活性。 3.運(yùn)用免疫印記Western blot檢測(cè)四組細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)處理后的OPN表達(dá)水平,應(yīng)用NO試劑盒測(cè)定四組細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)處理后的NO含量。 4.采用SPSS17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1.體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細(xì)胞生長狀況良好,對(duì)平行板流室產(chǎn)生的力學(xué)刺激反應(yīng)良好。 2.與空白對(duì)照組相比,0.12mN·cm-2的FSS作用1h可以明顯提高M(jìn)C3T3-E1細(xì)胞ALP活性(P0.05),而MTT未見明顯變化(P0.05)；Notch信號(hào)抑制劑的應(yīng)用可以明顯降低應(yīng)力以及非載荷下MC3T3-E1細(xì)胞的ALP活性和MTT值(P0.05)。 3.與空白對(duì)照組相比,0.12mN·cm-2的FSS作用1h可以明顯提高M(jìn)C3T3-E1中OPN蛋白的表達(dá)和NO的釋放(P0.05),施加Notch信號(hào)抑制劑后,FSS作用下以及靜置狀態(tài)下的MC3T3-E1細(xì)胞OPN表達(dá)及NO產(chǎn)量均顯著下降(P0.05)。 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)建立的平行板流室加力系統(tǒng)可用于研究貼壁生長的MC3T3-E1細(xì)胞對(duì)流體剪應(yīng)力的生物學(xué)反應(yīng),能模擬成骨細(xì)胞所處的環(huán)境并實(shí)現(xiàn)對(duì)成骨細(xì)胞力學(xué)加載,為深入研究成骨細(xì)胞中力學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 2.Notch信號(hào)通路在正常生理環(huán)境中存在且參與成骨細(xì)胞的正常增殖分化活動(dòng),0.12mN·cm-2的FSS刺激1h可以通過Notch信號(hào)傳導(dǎo)通路起到調(diào)節(jié)MC3T3-E1細(xì)胞增殖分化活動(dòng)的作用。 3.Notch信號(hào)通路在正常生理環(huán)境中存在且調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞中OPN蛋白的表達(dá)和NO的產(chǎn)生,0.12mN·cm-2的FSS刺激1h可以通過Notch信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)MC3T3-E1中OPN表達(dá)及NO釋放。
【關(guān)鍵詞】：流體剪切力 MC3T3-E1細(xì)胞 Notch信號(hào)通路 骨橋蛋白(OPN) 一氧化氮(NO)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 目錄4-5
• CONSTENTS5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 第一部分 MC3T3-E1細(xì)胞的培養(yǎng)以及平行板流室加力裝置的建立15-22
• 材料與方法16-19
• 結(jié)果19-20
• 討論20-22
• 第二部分 流體剪切力作用下Notch信號(hào)對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞增殖分化的影響22-30
• 材料與方法23-26
• 結(jié)果26-27
• 討論27-30
• 第三部分 Notch信號(hào)在流體剪切力介導(dǎo)的成骨細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)中作用地位的研究30-39
• 材料與方法31-35
• 結(jié)果35-36
• 討論36-39
• 全文總結(jié)39-41
• 附圖41-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章53-54
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸群,吳補(bǔ)領(lǐng),王冀姝,韓驊,周學(xué)東;Notch信號(hào)分子于小鼠牙髓干細(xì)胞樣細(xì)胞表達(dá)的研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2004年01期

2 曾燁;劉肖珩;;對(duì)細(xì)胞施加力學(xué)作用的實(shí)驗(yàn)方法[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2007年03期

3 劉路;韋曦;吳莉萍;凌均h，

本文編號(hào)：977659