本文關(guān)鍵詞：結(jié)核桿菌全菌裂解物和全脂質(zhì)抗原對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞活化和增殖的作用

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【摘要】：背景及目的由結(jié)核分枝桿菌（Mtb）感染所致的結(jié)核病是人類已知的最古老的傳染病之一，但至今其預(yù)防和治療仍不盡人意。近年來(lái)，結(jié)核病仍是世界范圍內(nèi)因感染單一病原體而死亡的最重要病因之一，且其患病人數(shù)持續(xù)增加�？ń槊缱鳛槲ㄒ挥行У谋Ｗo(hù)性疫苗，已經(jīng)保護(hù)人類近一百年。世界衛(wèi)生組織（WHO）報(bào)道，對(duì)于兒童注射卡介苗進(jìn)行結(jié)核病預(yù)防是有效的，特別是較嚴(yán)重類型結(jié)核�。ㄈ缃Y(jié)核性腦膜炎、粟粒性結(jié)核�。珜�(duì)保護(hù)成人肺結(jié)核方面缺乏穩(wěn)定性。所以開發(fā)新型疫苗勢(shì)在必行。目前對(duì)Mtb大部分疫苗和T細(xì)胞表位的研究都側(cè)重于由MHCⅡ類分子提呈的分泌到胞外的可溶性蛋白，對(duì)于胞壁中的抗原成分了解甚少。Mtb細(xì)胞壁中的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，就像一層厚厚的保護(hù)莢膜，可以抵抗不利環(huán)境的侵害，這些脂質(zhì)成分具有免疫調(diào)節(jié)作用，在宿主固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)中都扮演著角色，提示脂類代謝可能是Mtb非比尋常的逃逸能力的核心。本實(shí)驗(yàn)擬觀察Mtb全菌裂解物和全脂質(zhì)抗原對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）活化和增殖的作用，進(jìn)而初步探討脂類抗原在結(jié)核感染中是否存在特異性作用。 方法健康成人PBMC1×106/ml，分別加結(jié)核桿菌全菌裂解物10μg/ml或全脂質(zhì)10μg/ml進(jìn)行刺激，同時(shí)給予重組人白介素-2（rhIL-2）50u/ml維持細(xì)胞增殖，另外設(shè)僅加rhIL-2的對(duì)照組，培養(yǎng)至第6、9、12天，，收集培養(yǎng)擴(kuò)增細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞以及不同亞群的增殖情況和胞內(nèi)細(xì)胞因子（IFN-γ）的產(chǎn)生。 結(jié)果兩組抗原刺激組均能刺激PBMC中T細(xì)胞的活化和增殖，第9天時(shí)反應(yīng)最為明顯，與對(duì)照組相比，全菌裂解物組CD8+T細(xì)胞比例降低而CD4-CD8-T細(xì)胞比例明顯增高；全脂質(zhì)組CD4+T細(xì)胞以及CD4+CD8+T細(xì)胞比例增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。全菌裂解物早期可以有效地刺激γδT細(xì)胞迅速增殖，而全脂質(zhì)組與對(duì)照組相比γδT細(xì)胞有所降低（P0.05）。培養(yǎng)至第12天，對(duì)分泌IFN-γ的細(xì)胞亞群分析，CD8+T細(xì)胞所占比例：全菌裂解物刺激組與全脂質(zhì)刺激組均高于其相應(yīng)的rhIL-2對(duì)照組（P0.05）；CD8-T細(xì)胞所占比例：全菌裂解物刺激組低于其相應(yīng)對(duì)照組（P0.05），而全脂質(zhì)刺激組高于其相應(yīng)對(duì)照組（P0.05）。 結(jié)論結(jié)核桿菌全脂質(zhì)抗原與全菌裂解物一樣，能激活特異性免疫反應(yīng)，具有潛在的疫苗組分可能性。
【關(guān)鍵詞】：分枝桿菌 結(jié)核 T淋巴細(xì)胞亞群 脂類
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 1 前言12-14
• 2 材料與方法14-21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 2.1.1 結(jié)核分枝桿菌抗原及其配制14
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本來(lái)源14
• 2.1.3 主要試劑14-15
• 2.1.4 主要儀器和設(shè)備15
• 2.1.5 主要試劑配制15-17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-20
• 2.2.1 人 AB 型血清的分離17
• 2.2.2 人外周血（全血）PBMC 分離17
• 2.2.3 人外周血白細(xì)胞濃縮液中 PBMC 分離17-18
• 2.2.4 PBMC 的凍存與復(fù)蘇18
• 2.2.5 CFSE 染色18
• 2.2.6 兩種抗原刺激人外周血 T 細(xì)胞亞群增殖的最適濃度及條件18-19
• 2.2.7 兩種抗原刺激 PBMC 和擴(kuò)增培養(yǎng)19
• 2.2.8 溶劑對(duì)照19
• 2.2.9 培養(yǎng)后細(xì)胞增殖情況及其增殖亞群檢測(cè)19-20
• 2.2.10 細(xì)胞活化指標(biāo)的檢測(cè)（CD69）20
• 2.2.11 胞內(nèi)細(xì)胞因子（IFN-γ）檢測(cè)20
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20-21
• 3 結(jié)果21-33
• 3.1 兩種抗原刺激人外周血 T 細(xì)胞亞群增殖的最適濃度及條件21
• 3.2 兩種抗原刺激實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組 PBMC 增殖情況21-22
• 3.3 溶劑對(duì)照22
• 3.4 兩種抗原刺激組增殖細(xì)胞的細(xì)胞表型分析22-28
• 3.4.1 T 細(xì)胞及其亞群（CD4、CD8）增殖情況22-25
• 3.4.2 γδT 細(xì)胞增殖情況25-27
• 3.4.3 B 細(xì)胞增殖情況27
• 3.4.4 NK 細(xì)胞增殖情況27-28
• 3.5 抗原刺激活化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果（CD69）28-31
• 3.6 抗原刺激擴(kuò)增培養(yǎng)后 T 細(xì)胞分泌 IFN-γ的檢測(cè)31-33
• 4 討論33-36
• 5 結(jié)論36-37
• 6 參考文獻(xiàn)37-43
• 附錄43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)49-52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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3 雷建平;彭燕;熊國(guó)亮;張玉珍;周軍;劉翼軍;邢娟娟;李光明;雷銘宙;袁小亮;涂榮耀;涂少華;;不同時(shí)期卡介苗免疫治療對(duì)結(jié)核病大鼠療效和CD4~+CD8~+雙陽(yáng)(DP)T細(xì)胞的影響[J];中國(guó)防癆雜志;2006年06期

本文編號(hào)：976100