發(fā)布時間：2017-10-05 09:39

  本文關鍵詞：結核桿菌全菌裂解物和全脂質抗原對人外周血單個核細胞活化和增殖的作用

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【摘要】：背景及目的由結核分枝桿菌（Mtb）感染所致的結核病是人類已知的最古老的傳染病之一，但至今其預防和治療仍不盡人意。近年來，結核病仍是世界范圍內因感染單一病原體而死亡的最重要病因之一，且其患病人數(shù)持續(xù)增加�？ń槊缱鳛槲ㄒ挥行У谋Ｗo性疫苗，已經(jīng)保護人類近一百年。世界衛(wèi)生組織（WHO）報道，對于兒童注射卡介苗進行結核病預防是有效的，特別是較嚴重類型結核�。ㄈ缃Y核性腦膜炎、粟粒性結核�。�，但對保護成人肺結核方面缺乏穩(wěn)定性。所以開發(fā)新型疫苗勢在必行。目前對Mtb大部分疫苗和T細胞表位的研究都側重于由MHCⅡ類分子提呈的分泌到胞外的可溶性蛋白，對于胞壁中的抗原成分了解甚少。Mtb細胞壁中的脂質結構，就像一層厚厚的保護莢膜，可以抵抗不利環(huán)境的侵害，這些脂質成分具有免疫調節(jié)作用，在宿主固有免疫和適應性免疫應答的誘導中都扮演著角色，提示脂類代謝可能是Mtb非比尋常的逃逸能力的核心。本實驗擬觀察Mtb全菌裂解物和全脂質抗原對人外周血單個核細胞（PBMC）活化和增殖的作用，進而初步探討脂類抗原在結核感染中是否存在特異性作用。 方法健康成人PBMC1×106/ml，分別加結核桿菌全菌裂解物10μg/ml或全脂質10μg/ml進行刺激，同時給予重組人白介素-2（rhIL-2）50u/ml維持細胞增殖，另外設僅加rhIL-2的對照組，培養(yǎng)至第6、9、12天，，收集培養(yǎng)擴增細胞，用流式細胞術檢測T細胞以及不同亞群的增殖情況和胞內細胞因子（IFN-γ）的產(chǎn)生。 結果兩組抗原刺激組均能刺激PBMC中T細胞的活化和增殖，第9天時反應最為明顯，與對照組相比，全菌裂解物組CD8+T細胞比例降低而CD4-CD8-T細胞比例明顯增高；全脂質組CD4+T細胞以及CD4+CD8+T細胞比例增高，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。全菌裂解物早期可以有效地刺激γδT細胞迅速增殖，而全脂質組與對照組相比γδT細胞有所降低（P0.05）。培養(yǎng)至第12天，對分泌IFN-γ的細胞亞群分析，CD8+T細胞所占比例：全菌裂解物刺激組與全脂質刺激組均高于其相應的rhIL-2對照組（P0.05）；CD8-T細胞所占比例：全菌裂解物刺激組低于其相應對照組（P0.05），而全脂質刺激組高于其相應對照組（P0.05）。 結論結核桿菌全脂質抗原與全菌裂解物一樣，能激活特異性免疫反應，具有潛在的疫苗組分可能性。
【關鍵詞】：分枝桿菌 結核 T淋巴細胞亞群 脂類
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 1 前言12-14
• 2 材料與方法14-21
• 2.1 實驗材料14-17
• 2.1.1 結核分枝桿菌抗原及其配制14
• 2.1.2 實驗標本來源14
• 2.1.3 主要試劑14-15
• 2.1.4 主要儀器和設備15
• 2.1.5 主要試劑配制15-17
• 2.2 實驗方法17-20
• 2.2.1 人 AB 型血清的分離17
• 2.2.2 人外周血（全血）PBMC 分離17
• 2.2.3 人外周血白細胞濃縮液中 PBMC 分離17-18
• 2.2.4 PBMC 的凍存與復蘇18
• 2.2.5 CFSE 染色18
• 2.2.6 兩種抗原刺激人外周血 T 細胞亞群增殖的最適濃度及條件18-19
• 2.2.7 兩種抗原刺激 PBMC 和擴增培養(yǎng)19
• 2.2.8 溶劑對照19
• 2.2.9 培養(yǎng)后細胞增殖情況及其增殖亞群檢測19-20
• 2.2.10 細胞活化指標的檢測（CD69）20
• 2.2.11 胞內細胞因子（IFN-γ）檢測20
• 2.3 統(tǒng)計學分析20-21
• 3 結果21-33
• 3.1 兩種抗原刺激人外周血 T 細胞亞群增殖的最適濃度及條件21
• 3.2 兩種抗原刺激實驗組及對照組 PBMC 增殖情況21-22
• 3.3 溶劑對照22
• 3.4 兩種抗原刺激組增殖細胞的細胞表型分析22-28
• 3.4.1 T 細胞及其亞群（CD4、CD8）增殖情況22-25
• 3.4.2 γδT 細胞增殖情況25-27
• 3.4.3 B 細胞增殖情況27
• 3.4.4 NK 細胞增殖情況27-28
• 3.5 抗原刺激活化指標的檢測結果（CD69）28-31
• 3.6 抗原刺激擴增培養(yǎng)后 T 細胞分泌 IFN-γ的檢測31-33
• 4 討論33-36
• 5 結論36-37
• 6 參考文獻37-43
• 附錄43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-52
• 參考文獻49-52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：976100