本文關(guān)鍵詞：LIF慢病毒載體的構(gòu)建及其在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)

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【摘要】：目的：將LIF基因在體外轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，轉(zhuǎn)染成功后通過測(cè)試，以確定LIF能否在轉(zhuǎn)染后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)，以促進(jìn)周圍神經(jīng)再生，減少疤痕。 方法：（1）大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離提取，原代培養(yǎng)及表型鑒定，采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，在倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)并繪制其生長(zhǎng)曲線，用流式細(xì)胞儀測(cè)定表面標(biāo)記對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。（2）LIF慢病毒載體的構(gòu)建、包裝。（3）LIF慢病毒載體在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中轉(zhuǎn)染，用ELISA檢測(cè)LIF基因及蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：（1）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功的從一周齡大鼠骨髓血內(nèi)分離出，，其鏡下表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)，可以向成脂、成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化，通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)，其表面標(biāo)記物CD44，CD90表達(dá)均為陽性，而CD34，CD45表達(dá)全部為陰性；（3）通過ELISA法進(jìn)行了蛋白鑒定，目的基因大鼠LIF在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中得到了穩(wěn)定表達(dá)。 結(jié)論： LIF基因片段通過脂質(zhì)體與慢病毒載體相連，將其轉(zhuǎn)染于體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)LIF基因可以在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)得到持續(xù)、穩(wěn)定的表達(dá)。研究證明LIF對(duì)損傷神經(jīng)損傷修復(fù)有重要作用，特別是對(duì)軸突的生長(zhǎng)有極大的促進(jìn)作用。LIF慢病毒載體構(gòu)建成功，LIF在局部持續(xù)、穩(wěn)定的表達(dá)，為神經(jīng)損傷的修復(fù)開辟了新途徑，為進(jìn)行下一步動(dòng)物試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 LIF 慢病毒載體
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-7
• 英文縮略語7-8
• 前言8-9
• 文獻(xiàn)綜述9-22
• 摘要9
• 1 周圍神經(jīng)損傷與再生9-13
• 2 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子13-17
• 3 間充質(zhì)干細(xì)胞17-21
• 4 展望21-22
• 實(shí)驗(yàn)研究22-35
• 1 大鼠骨髓干細(xì)胞的提取、分離、培養(yǎng)及鑒定22-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-25
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-31
• 2 LIF基因轉(zhuǎn)染于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及檢測(cè)31-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料31-32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法32-33
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-35
• 討論35-37
• 結(jié)語37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-46

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 崔明亮;心內(nèi)膜下移植骨髓單個(gè)核細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)豬急性心肌梗死療效的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 項(xiàng)永生;強(qiáng)化表達(dá)VEGF的骨髓基質(zhì)細(xì)胞系的構(gòu)建及其鑒定[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

3 姜南;大鼠坐骨神經(jīng)橫斷后近遠(yuǎn)端神經(jīng)基因表達(dá)和生物學(xué)進(jìn)程分析的對(duì)比研究[D];吉林大學(xué);2014年

本文編號(hào)：973573