本文關(guān)鍵詞：LIF慢病毒載體的構(gòu)建及其在骨髓間充質(zhì)干細胞中的穩(wěn)定表達

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細胞 LIF 慢病毒載體

【摘要】：目的：將LIF基因在體外轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染于骨髓間充質(zhì)干細胞，轉(zhuǎn)染成功后通過測試，以確定LIF能否在轉(zhuǎn)染后的骨髓間充質(zhì)干細胞中穩(wěn)定表達，以促進周圍神經(jīng)再生，減少疤痕。 方法：（1）大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分離提取，原代培養(yǎng)及表型鑒定，采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，在倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)并繪制其生長曲線，用流式細胞儀測定表面標(biāo)記對骨髓間充質(zhì)干細胞進行鑒定。（2）LIF慢病毒載體的構(gòu)建、包裝。（3）LIF慢病毒載體在骨髓間充質(zhì)干細胞中轉(zhuǎn)染，用ELISA檢測LIF基因及蛋白表達水平。 結(jié)果：（1）骨髓間充質(zhì)干細胞成功的從一周齡大鼠骨髓血內(nèi)分離出，，其鏡下表現(xiàn)為成纖維細胞樣生長，可以向成脂、成骨細胞轉(zhuǎn)化，通過流式細胞儀檢測，其表面標(biāo)記物CD44，CD90表達均為陽性，而CD34，CD45表達全部為陰性；（3）通過ELISA法進行了蛋白鑒定，目的基因大鼠LIF在骨髓間充質(zhì)干細胞中得到了穩(wěn)定表達。 結(jié)論： LIF基因片段通過脂質(zhì)體與慢病毒載體相連，將其轉(zhuǎn)染于體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞，發(fā)現(xiàn)LIF基因可以在骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)得到持續(xù)、穩(wěn)定的表達。研究證明LIF對損傷神經(jīng)損傷修復(fù)有重要作用，特別是對軸突的生長有極大的促進作用。LIF慢病毒載體構(gòu)建成功，LIF在局部持續(xù)、穩(wěn)定的表達，為神經(jīng)損傷的修復(fù)開辟了新途徑，為進行下一步動物試驗奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細胞 LIF 慢病毒載體
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-7
• 英文縮略語7-8
• 前言8-9
• 文獻綜述9-22
• 摘要9
• 1 周圍神經(jīng)損傷與再生9-13
• 2 神經(jīng)營養(yǎng)因子13-17
• 3 間充質(zhì)干細胞17-21
• 4 展望21-22
• 實驗研究22-35
• 1 大鼠骨髓干細胞的提取、分離、培養(yǎng)及鑒定22-31
• 1.1 實驗材料22-25
• 1.2 實驗方法25-27
• 1.3 實驗結(jié)果27-31
• 2 LIF基因轉(zhuǎn)染于骨髓間充質(zhì)干細胞及檢測31-35
• 2.1 實驗材料31-32
• 2.2 實驗方法32-33
• 2.3 實驗結(jié)果33-35
• 討論35-37
• 結(jié)語37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-46

【共引文獻】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 崔明亮;心內(nèi)膜下移植骨髓單個核細胞和間充質(zhì)干細胞對豬急性心肌梗死療效的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 項永生;強化表達VEGF的骨髓基質(zhì)細胞系的構(gòu)建及其鑒定[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

3 姜南;大鼠坐骨神經(jīng)橫斷后近遠端神經(jīng)基因表達和生物學(xué)進程分析的對比研究[D];吉林大學(xué);2014年

本文編號：973573