本文關(guān)鍵詞：伯氏疏螺旋體重組膜蛋白rBmpA對(duì)人巨噬細(xì)胞株THP-1細(xì)胞體外作用研究

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【摘要】：研究目的： 體外培養(yǎng)人單核巨噬細(xì)胞株(THP-1細(xì)胞),使用不同濃度伯氏疏螺旋體重組膜蛋白-rBmpA刺激THP-1細(xì)胞,收集不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)上清液,檢測(cè)細(xì)胞上清中細(xì)胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12p70,TNF-α及MIF含量,來(lái)探討伯氏疏螺旋體膜蛋白-BmpA在萊姆關(guān)節(jié)炎致病機(jī)制中的作用。 研究方法： 1、THP-1細(xì)胞培養(yǎng)：在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,平均3-4天換液傳代一次。 2、THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)：調(diào)整THP-1細(xì)胞數(shù)為5×105/mL,加入PMA,使PMA的濃度為100ng/ML。將細(xì)胞懸液加入到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,100μL/孔,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞貼壁。 3、rBnpA處理THP-1細(xì)胞：細(xì)胞貼壁后,吸掉上清,之后加入LPS及rBmpA處理細(xì)胞,放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,48小時(shí),72小時(shí)。分別收集各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)上清。 4、細(xì)胞因子檢測(cè)：ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中炎性細(xì)胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8, IL-12p70,TNF-α及MIF含量。 研究結(jié)果： 1、THP-1細(xì)胞在10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基中懸浮生長(zhǎng),生長(zhǎng)狀態(tài)良好。 2、THP-1細(xì)胞在100ng/ml-PMA作用下成功分化為成熟的貼壁細(xì)胞。 3、檢測(cè)THP-1細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎性細(xì)胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12-,70和TNF-α含量,與正常對(duì)照組比較,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。 4、檢測(cè)THP-1細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子人MIF含量,與正常對(duì)照組比較,差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1、rBmpA在刺激THP-1細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子人IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12p-,70和TNF-α中起到關(guān)鍵作用。 2、rBmpA(20ug/mL、40ug/mL)不能刺激THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子人MIF。 3、BmpA可能通過(guò)誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生引起萊姆關(guān)節(jié)炎。
【關(guān)鍵詞】：萊姆關(guān)節(jié)炎 伯氏疏螺旋體 rBmpA 巨噬細(xì)胞細(xì)胞株
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R377
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 相關(guān)縮略詞10-11
• 前言11-16
• 1 BmpA(Borrelia burgdorferi membrance protein A)12
• 2 BmpA與萊姆關(guān)節(jié)炎關(guān)系12-13
• 3 萊姆關(guān)節(jié)炎致病機(jī)制13-16
• 1 材料16-19
• 1.1 主要儀器16-17
• 1.2 主要試劑17-18
• 1.3 主要溶液試劑配制18-19
• 2 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 2.1 rBmpA蛋白液制備19
• 2.2 THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代19-20
• 2.3 THP-1細(xì)胞的誘導(dǎo)20
• 2.4 加rBmpA處理THP-1細(xì)胞20-21
• 2.5 細(xì)胞因子檢測(cè)21
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-31
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)觀察23-25
• 3.2 rBmpA對(duì)THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HumanIL-1β的測(cè)定25-26
• 3.3 rBmpA對(duì)THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HumanIL-6的測(cè)定26-27
• 3.4 rBmpA對(duì)THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HumanIL-8的測(cè)定27-28
• 3.5 rBmpA對(duì)THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HumanIL-12p70的測(cè)定28-29
• 3.6 rBmpA對(duì)THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HumanTNF-α的測(cè)定29-30
• 3.7 rBmpA對(duì)THP-1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HumanMIF的測(cè)定30-31
• 4 討論31-33
• 5 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述37-44
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文44-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：972303