本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用嘌呤霉素腎炎模型研究足細(xì)胞損害與腎小球硬化進(jìn)展的過(guò)程

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【摘要】：背景與目的：足細(xì)胞損害貫穿于腎小球疾病和腎小球硬化的始終，嘌呤霉素氨基核苷大鼠腎病模型（PAN模型）是典型的反映足細(xì)胞損傷的動(dòng)物模型，多年來(lái)用于足細(xì)胞損傷的腎小球疾病的研究。本研究應(yīng)用PAN模型，從臨床、病理及足細(xì)胞相關(guān)蛋白nephrin和WT-1在足細(xì)胞中的表達(dá)等方面研究疾病不同階段足細(xì)胞損害在腎小球硬化進(jìn)展過(guò)程中的意義。 方法：?jiǎn)未挝察o脈注射嘌呤霉素氨基核苷制作PAN模型，對(duì)照組注射等量生理鹽水。測(cè)定4周、14周及20周的血壓、24小時(shí)尿蛋白定量、血酯及血肌酐等指標(biāo)，并處死大鼠，取其腎臟，石蠟包埋，切片，PAS及免疫組化染色，高倍鏡下拍片。PAS染色測(cè)定腎小球面積及硬化指數(shù)，免疫組化進(jìn)行nephrin及WT-1表達(dá)的染色，，半定量分析測(cè)定nephrin的表達(dá)，在顯微鏡高倍鏡下計(jì)數(shù)腎小球WT-1表達(dá)的足細(xì)胞核的數(shù)量，上述所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：1.臨床指標(biāo)：PAN組的24小時(shí)尿蛋白定量在第8天達(dá)峰值，同時(shí)血漿蛋白明顯降低，血膽固醇和甘油三酯明顯增高；24小時(shí)尿蛋白定量在第4周降至正常，然后又逐漸增高，在14周和20周時(shí)顯著高于對(duì)照組；PAN組收縮壓在4周、14周和20周均值分別是131.40mmHg，143.43mmHg，和133.56mmHg，均高于對(duì)照組；PAN組血清肌酐在4周時(shí)為50.54±3.66μmol/L，隨著時(shí)間增長(zhǎng)，20周為70.62±4.83μmol/L明顯高于對(duì)照組。上述數(shù)據(jù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.形態(tài)學(xué)指標(biāo)：PAN組的腎小球硬化指數(shù)(GSI)在4周、14周和20周分別是6.21%，25.35%和30.49%，明顯高于對(duì)照組。PAN組在4周時(shí)腎小球面積與對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異（395.44±5.55μm2和381.31±4.94μm2，P0.05）、14周時(shí)PAN組的腎小球面積大于對(duì)照組（均值為522.36±13.04μm2和469.20±8.16μm2， P0.01）。但是在20周時(shí)PAN組腎小球面積小于對(duì)照組（438.59±12.11μm2和492.69±58.24μm2，P0.001）,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且20周時(shí)腎小球硬化指數(shù)與腎小球面積之間的相關(guān)系數(shù)為-0.82，呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)關(guān)系。3.nephrin的表達(dá)：對(duì)照組免疫組化染色nephrin沿腎小球毛細(xì)血管襻呈較為均勻的黃褐色粗顆粒樣的線狀分布，而PAN組在4周時(shí)與對(duì)照組比較nephrin略有分布不均，部分區(qū)域染色減弱或消失（均值為8.23±0.875和10.23±1.256，P0.001），14周時(shí)在有節(jié)段性硬化的區(qū)域nephrin無(wú)表達(dá)（均值為7.58±0.712和9.74±1.234，P0.001），而在20周時(shí)硬化的區(qū)域基本無(wú)表達(dá)（均值為6.08±1.342和7.88±0.924，P0.001），與對(duì)照組比較均有明顯減少。4.WT-1的表達(dá)：4周時(shí)WT-1在足細(xì)胞核表達(dá)，呈深棕黃色粗大顆粒，與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均值為10.11±1.557和10.14±2.022，P0.05）；14周時(shí)PAN組WT-1表達(dá)較對(duì)照組有所減少（均值為6.8±1.887和9.02±1.732, P0.001）；20周時(shí)與對(duì)照組比較PAN組WT-1明顯減少（均值為4.43±1.007和7.34±1.216，P0.001），足細(xì)胞數(shù)量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)依次遞減。 結(jié)論：1.成功建立PAN模型，早期典型腎病綜合征、逐漸發(fā)展為慢性腎臟�。–KD），腎小球硬化的過(guò)程；2.在PAN模型中，在20周時(shí)腎小球硬化指數(shù)和腎小球面積之間是負(fù)相關(guān)關(guān)系，腎小球硬化程度越重，腎小球面積越小；3. nephrin的表達(dá)在PAN模型（腎病綜合征期）略有下降，在CKD腎小球硬化過(guò)程中進(jìn)行性減少，WT-1的表達(dá)隨著CKD的進(jìn)展逐漸減少。nephrin表達(dá)的降低可以反映足細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及功能破壞的程度，WT-1的表達(dá)減少可反映足細(xì)胞數(shù)量的減少。因此，足細(xì)胞的損傷與腎小球硬化有密切的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：嘌呤霉素氨基核苷大鼠模型(PAN) 腎小球面積 腎小球硬化 nephrin WT-1 CKD
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R692.3;R-332
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-14
• 引言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-19
• 材料和方法19-26
• 1 材料19-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 1.2 藥物及試劑19
• 1.3 試劑的配置19-20
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 2 方法21-24
• 2.1 大鼠嘌呤霉素氨基核苷腎病模型的建立21
• 2.2 各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定21-22
• 2.3 腎小球硬化指數(shù)的測(cè)定22-23
• 2.4 腎小球面積的測(cè)定23
• 2.5 腎小球 nephrin 的表達(dá)23-24
• 2.6 WT-1 的測(cè)定24
• 3 統(tǒng)計(jì)24-26
• 結(jié)果26-30
• 1 動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)26-27
• 1.1 PAN 注射后 24 小時(shí)尿蛋白定量的改變26
• 1.2 PAN 注射后各種血清生化指標(biāo)的改變26-27
• 1.3 PAN 注射后收縮壓的改變27
• 2 腎小球面積及腎小球硬化指數(shù)的關(guān)系27-28
• 2.1 腎小球硬化（FSGS）的形成27
• 2.2 PAN 模型大鼠腎小球面積的改變27-28
• 2.3 PAN 模型大鼠腎小球面積（GA）與腎小球硬化指數(shù)（GI）的關(guān)系28
• 3 nephrin 的表達(dá)28-29
• 4 WT-1 的表達(dá)29-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖35-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 糖尿病腎病足細(xì)胞損傷的機(jī)理48-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄60

【共引文獻(xiàn)】

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8 王

本文編號(hào)：955165