本文關(guān)鍵詞：廣州管圓線蟲感染小鼠腦組織cathepsins表達(dá)變化及AcHTCP基因的克隆

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【摘要】：廣州管圓線蟲病（Angiostrongyliasis cantonensis）是由廣州管圓線蟲Angiostrongylus cantonensis (Ac)引起的以中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥為主的食源性寄生蟲病。軟體動(dòng)物螺類，如非洲大蝸牛Achatina fulica (Ferussac,1821)、福壽螺Pomacea canaliculata (Lamarck,1819)是Ac中間宿主、大鼠是Ac的終宿主、人和小鼠等是其非適宜宿主。人多因生食含有三期幼蟲的淡水螺肉而感染。 廣州管圓線蟲病主要在東南亞和太平洋島嶼流行。自1945年臺(tái)灣首例報(bào)道之后，國(guó)內(nèi)也陸續(xù)出現(xiàn)新發(fā)病例報(bào)道，而且在浙江和北京均出現(xiàn)大規(guī)模爆發(fā)流行，我國(guó)衛(wèi)生部于2003年將廣州管圓線蟲病列為新發(fā)傳染病。目前，臨床上廣州管圓線蟲病主要診斷依據(jù)包括三個(gè)方面：接觸史、臨床癥狀和ELISA檢測(cè)結(jié)果。從感染患者腦脊液中檢測(cè)到蟲體是診斷此病的金標(biāo)準(zhǔn)，盡管此方法結(jié)果可靠，但是檢出率很低，而且是侵襲性檢查，因此難以普及，臨床上也少見(jiàn)使用。實(shí)驗(yàn)室最常采用的診斷方法是ELISA法（檢測(cè)患者血清特異性抗體），但用于ELISA法的抗原是蟲體粗抗原，不但敏感性和特異性有待提高，也無(wú)法用于療效考核。因此，尋找具有診斷價(jià)值的生物標(biāo)記物對(duì)于改進(jìn)和完善廣州管圓線蟲病的診斷方法具有重要意義。 從已有的研究中不難發(fā)現(xiàn)，在寄生蟲感染宿主過(guò)程中，宿主和寄生蟲的組織蛋白酶均發(fā)揮重要作用。小鼠組織蛋白酶亞型眾多，搜索Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)可得到18種組織蛋白酶亞型，即是：CathepsinA,B,C,D,E,F,G,H,J,K,L,M,O,Q,R,S,W,Z。通過(guò)對(duì)有關(guān)宿主組織蛋白酶文獻(xiàn)的分析，推測(cè)小鼠組織蛋白酶可能參與寄生蟲感染所致腦炎的過(guò)程。 從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得廣州管圓線蟲血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶（Angiostrongylus cantonensis hemoglobinase-type cysteine proteinase GenBank號(hào)碼：HQ110101.1）基因序列。研究發(fā)現(xiàn)蟲源性組織蛋白酶與寄生蟲的宿主入侵、自身保護(hù)和免疫逃避相關(guān)。 本研究分兩個(gè)部分：①感染BALB/c小鼠腦部組織蛋白酶各亞型的表達(dá)譜及變化規(guī)律研究；②廣州管圓線蟲血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶基因的克隆。 第一部分感染小鼠腦部組織蛋白酶各亞型的表達(dá)譜及其變化規(guī)律研究 研究目的 研究BALB/c小鼠Ac感染模型，動(dòng)態(tài)觀察感染BALB/c小鼠組織蛋白酶亞型的表達(dá)譜及表達(dá)譜的變化。為進(jìn)一步尋找到可作為診斷廣州管圓線蟲病的生物標(biāo)記物（biomarker）提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 研究?jī)?nèi)容和方法 1.在GenBank中查找小鼠不同亞型組織蛋白酶家族基因序列信息。 2.通過(guò)網(wǎng)站https://www.genscript.com/ssl-bin/app/primer，分別設(shè)計(jì)小鼠組織蛋白酶18個(gè)亞型（包括：cathepsinA,B,C,D,E,F,G,H,J,K,L,M,O,Q,R,S,W,Z）的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR）引物。 3.建立感染廣州管圓線蟲病的BALB/c小鼠動(dòng)物模型，收集感染不同時(shí)點(diǎn)（7d、14d、21d）的腦組織，用Real-time PCR檢測(cè)分析小鼠感染后各種亞型基因的表達(dá)情況。 研究結(jié)果 1.在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中共發(fā)現(xiàn)小鼠組織蛋白酶18個(gè)亞型，包括：cathepsinA,B,C,D,E,F,G,H,J,K,L,M,O,Q,R,S,W,Z。 2.建立感染廣州管圓線蟲病BALB/c小鼠模型，通過(guò)對(duì)感染過(guò)程腦組織組織蛋白酶各亞型的表達(dá)水平的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同亞型組織蛋白酶表達(dá)呈現(xiàn)三種變化趨勢(shì)：逐步上升型（cathepsin C、E、S、Z）、陡然上升型（cathepsin G、K、L、M、Q、R）及不規(guī)則變化型（cathepsin J）。 小結(jié) 本次研究結(jié)果表明，感染廣州管圓線蟲病后，，BALB/c小鼠的組織蛋白酶各亞型的表達(dá)水平發(fā)生變化，大多數(shù)組織蛋白酶亞型出現(xiàn)表達(dá)水平的升高。分析結(jié)果提示，小鼠組織蛋白酶S、C和M型具有進(jìn)一步的研究意義。 第二部分廣州管圓線蟲的血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶基因的克隆 研究目的 對(duì)廣州管圓線蟲血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶（AcHTCP）基因進(jìn)行克隆和初步表達(dá)，為后續(xù)進(jìn)一步研究此蛋白酶的免疫學(xué)功能做準(zhǔn)備。 研究?jī)?nèi)容和方法 1.從GenBank中查找到AcHTCP序列信息，并對(duì)序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 2.按常規(guī)方法，構(gòu)建pET32a(+)/AcHTCP重組質(zhì)粒，進(jìn)行原核表達(dá)。 研究結(jié)果 成功構(gòu)建pET32a(+)/AcHTCP重組質(zhì)粒；成功建立AcHTCP原核表達(dá)體系，并進(jìn)行初步原核表達(dá)。 小結(jié) 構(gòu)建pET32a(+)/AcHTCP重組表達(dá)體系，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：廣州管圓線蟲病 廣州管圓線蟲 組織蛋白酶 血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶 克隆表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R383.19
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞表9-13
• 前言13-19
• 1. 廣州管圓線蟲及廣州管圓線蟲病的研究現(xiàn)狀13-14
• 2. 小鼠組織蛋白酶的研究現(xiàn)狀14-17
• 2.1 組織蛋白酶 A14-15
• 2.2 組織蛋白酶 B15
• 2.3 組織蛋白酶 C15
• 2.4 組織蛋白酶 D15
• 2.5 組織蛋白酶 E15
• 2.6 組織蛋白酶 F15
• 2.7 組織蛋白酶 G15-16
• 2.8 組織蛋白酶 H16
• 2.9 組織蛋白酶 K16
• 2.10 組織蛋白酶 L116
• 2.11 組織蛋白酶 L2（半胱氨酸蛋白酶）16
• 2.12 組織蛋白酶 O（半胱氨酸蛋白酶）16
• 2.13 組織蛋白酶 S（半胱氨酸蛋白酶）16-17
• 2.14 組織蛋白酶 W（半胱氨酸蛋白酶）17
• 2.15 組織蛋白酶 Z/X（半胱氨酸蛋白酶）17
• 3. 寄生蟲組織蛋白酶的研究現(xiàn)狀17-19
• 3.1 寄生蟲組織蛋白酶17-18
• 3.2 廣州管圓線蟲組織蛋白酶18
• 3.3 廣州管圓線蟲血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶（AcHTCP）18-19
• 第一部分 感染小鼠腦部組織蛋白酶各亞型的表達(dá)譜及表達(dá)變化規(guī)律研究19-39
• 材料與方法19-24
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法20-24
• 結(jié)果24-38
• 1. 感染 Ac 后小鼠腦組織中組織蛋白酶基因的表達(dá)譜24-27
• 2. 組織蛋白酶表達(dá)譜的變化規(guī)律研究27-38
• 討論38-39
• 第二部分 廣州管圓線蟲的血紅蛋白型半胱氨酸蛋白酶（AcHTCP）基因的克隆39-53
• 材料與方法39-44
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法40-44
• 結(jié)果44-52
• 1. AcHTCP 編碼基因序列的生物信息學(xué)分析44-48
• 2．AcHTCP 基因的克隆和初步表達(dá)48-52
• 討論52-53
• 全文小結(jié)和研究工作展望53-54
• 1．全文小結(jié)53
• 2．研究工作展望53-54
• 致謝54-55
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 在讀期間發(fā)表的論文59-60
• 綜述60-69
• 參考文獻(xiàn)66-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：945326