發(fā)布時間：2017-09-30 01:15

  本文關(guān)鍵詞：甘露糖受體及TLR4信號通路在尼古丁增強樹突狀細胞抗原交叉提呈中的作用

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【摘要】：樹突狀細胞(dendritic cell, DCs)是表達乙酰膽堿N型受體(nicotinic acetylcholine receptor,nAchR)的抗原提呈細胞(antign presenting cell, APC)。我們前期研究發(fā)現(xiàn),尼古丁可調(diào)控小鼠骨髓來源的DCs表面nAchR及CD80/86等分子表達而增強DCs介導的CTL應答,尼古丁刺激DCs所表現(xiàn)的抗腫瘤效應提示尼古丁可調(diào)控DCs的交叉提呈能力。甘露糖受體(Mannose receptor, MR)是DCs表面重要的模式識別受體,DCs對抗原的交叉提呈不僅依賴于MR介導的抗原內(nèi)吞而且也依賴于TLR4通路活化所致的TAP內(nèi)體轉(zhuǎn)位。但到目前為止,尚不清楚MR及TAP內(nèi)體轉(zhuǎn)位在尼古丁調(diào)控DCs交叉提呈中作用,尼古丁對人DCs是否也有類似的調(diào)控作用也有待于進一步驗證。為此,本課題先以流式細胞術(shù)、Western Blot檢測尼古丁對DCs表面MR, TLR4表達的影響；次以通路抑制劑阻遏相應激酶活性,流式細胞術(shù)、Western Blot發(fā)現(xiàn)尼古丁調(diào)控MR、TLR4機制；繼以激光共聚焦顯微鏡結(jié)合基因沉默技術(shù)觀察MR、TLR4信號活化在尼古丁增強DCs交叉提呈中的作用；最后以人外周血單核細胞誘導DCs,進一步驗證尼古丁對DCs表面分子的調(diào)控作用及其機制,為尼古丁調(diào)控DCs的臨床應用提供理論基礎(chǔ)。 結(jié)果顯示：尼古丁刺激不僅明顯增加DCs表面MR和TLR4分子的表達并將DCs的吞噬能力提高約160%,而且也明顯上調(diào)CD80和4-1BBL分子的表達,而nAchR特異性和非特異性拮抗劑α-銀環(huán)蛇毒素和筒箭毒堿則明顯逆轉(zhuǎn)尼古丁對CD80、4-1BBL的上調(diào)作用,提示尼古丁經(jīng)nAchR上調(diào)DCs表面MR、CD80、4-1BBL分子表達；對信號激酶磷酸化的檢測顯示,尼古丁在5-15分鐘明顯引起ERK1/2磷酸化,P13K激酶的磷酸化也在尼古丁刺激5-30分鐘出現(xiàn)。而以LY294002和Wortmannin抑制相應激酶活性后,尼古丁對TLR4和MR分子的上調(diào)作用消失,提示尼古丁經(jīng)PI3K-Akt通路上調(diào)DCs表面TLR4和MR表達；激光共聚焦顯微鏡觀察顯示,尼古丁刺激不僅增強OVA與早期內(nèi)體標志分子EEA1共定位,也促進MR與EEAl的共定位,而MR基因沉默則顯著抑制OVA-EEA1的共定位,提示尼古丁經(jīng)調(diào)控MR表達而促進內(nèi)吞抗原OVA定位于內(nèi)體；對DCs交叉提呈產(chǎn)物SIINFEKL-H2Kb的激光共聚焦和流式細胞術(shù)檢測則發(fā)現(xiàn),尼古丁刺激不僅增加SIINFEKL與EEA1、Rab7、MHC I類分子共定位,也促進MHC Ⅰ類分子與EEA、Rab7的共定位和SIINFEKL-H2Kb復合物的形成,而沉默MR表達則SIINFEKL與EEA1、Rab7分子的共定位消失及SIINFEKL-H2Kb復合物的減少,提示尼古丁對DCs交叉提呈的增強作用依賴于MR介導的內(nèi)吞抗原定位于內(nèi)體；以LPS活化TLR4信號不僅明顯增強TAP與EEA1、TAP與Rab7共定位,而且也顯著增強SIINFEKL與EEA1、SIINFEKL與MHC I類分子及MHCⅠ類分子與EEA1的共定位及SIINFEKL-H2Kb復合物的形成,與MHC I類分子相反,MHC II類分子與SIINFEKL、Rab7共定位并不受到LPS影響。當以SiRNA轉(zhuǎn)染沉默MyD88表達時,不僅LPS誘導的TAP內(nèi)體轉(zhuǎn)位明顯降低,而且SIINFEKL與MHC I類分子于內(nèi)體的共定位、SIINFEKL-H2Kb復合物的形成也明顯降低,提示尼古丁對DCs形成SIINFEKL-MHC I類分子復合物的能力依賴于LPS誘導的MyD88介導的TAP內(nèi)體轉(zhuǎn)位；以人外周血來源的DCs進行的實驗發(fā)現(xiàn)尼古丁通過nAchR-PI3K-Akt通路調(diào)控DCs表面nAchR、MR、TLR4、CD80、 CD86、4-1BBL等分子的表達,尼古丁對DCs交叉提呈能力的增強作用也依賴于MyD88介導的TAP內(nèi)體轉(zhuǎn)位。綜上所述：本課題發(fā)現(xiàn)了尼古丁調(diào)控DCs表面模式識別受體的規(guī)律,初步闡明了尼古丁增強DCs交叉提呈抗原的分子機制,為開展尼古丁刺激DCs的免疫治療提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：尼古丁 樹突狀細胞 交叉提呈 TLR4 CD206
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 縮略語索引4-6
• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 目錄10-12
• Table of Contents12-14
• 前言14-19
• 實驗材料和方法19-32
• 1 實驗材料19-25
• 2 實驗方法25-32
• 實驗結(jié)果32-58
• 1、尼古丁增強樹突狀細胞對抗原的吞噬32
• 2、乙酰膽堿N型受體激動劑尼古丁上調(diào)樹突狀細胞表面TLR4和甘露糖受體分子表達32-33
• 3、乙酰膽堿N型受體激動劑尼古丁通過α7 nAchR上調(diào)樹突狀細胞表面共刺激分子CD80和4-1BBL表達33-35
• 4、尼古丁、內(nèi)毒素LPS上調(diào)樹突狀細胞表面分子CD80、4-1BBL、MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子表達35-37
• 5、尼古丁增強DCs抗原交叉提呈能力依賴于TLR4信號活化及蛋白酶體37-38
• 6、PI3K-Akt通路參與尼古丁調(diào)控DCs表面TLR4和MR分子表達38
• 7、尼古丁可增強MR與抗原結(jié)合并促進抗原分子定位于早期內(nèi)體38-40
• 8、尼古丁對DCs交叉提呈的增強作用依賴于MR介導抗原內(nèi)吞定位于內(nèi)體40-42
• 9、早期內(nèi)體是尼古丁增強DCs交叉提呈的關(guān)鍵器室42-43
• 10、TAP轉(zhuǎn)位于內(nèi)體與尼古丁增強DCs交叉提呈抗原能力相關(guān)43-44
• 11、α7 nAchR在尼古丁上調(diào)人DCs表面分子CD80、CD206和TLR4分子表達中發(fā)揮重要作用44-46
• 12、α7 nAchR在尼古丁上調(diào)入DCs表面分子α7 nAchR、MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子表達發(fā)揮重要作用46-47
• 13、PI3K-Akt通路參與尼古丁調(diào)控人DCs表面分子表達47-49
• 14、TLR4信號活化促進抗原于早期內(nèi)體的共定位49-51
• 15、TLR4活化所致TAP的內(nèi)體轉(zhuǎn)位明顯增強人DCs的交叉提呈抗原能力51-52
• 16、甘露糖受體是尼古丁增強DCs交叉提呈能力的關(guān)鍵分子52-54
• 17、接頭蛋白MyD88是尼古丁增強DCs交叉提呈的關(guān)鍵分子54-56
• 18、MyD88分子依賴的TAP轉(zhuǎn)位是尼古丁增強DCs抗原交叉提呈的關(guān)鍵56-58
• 討論58-63
• 結(jié)論63-64
• 參考文獻64-72
• 致謝72-73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉如玉;顧然;齊曉嵐;陳佳;劉家騮;官志忠;;β-淀粉樣蛋白對大鼠大腦α7尼古丁受體表達和學習記憶能力的影響[J];中國老年學雜志;2007年19期

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本文編號：945293