本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲過氧化物氧化還原蛋白SjPrxⅠ的原核表達(dá)及其免疫調(diào)節(jié)功能

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【摘要】：目的對(duì)日本血吸蟲氧化還原蛋白(peroxiredoxin of schistosoma japonicum,SjPrx)的表達(dá)、純化,接種小鼠和體外刺激脾細(xì)胞,研究SjPrx I在體內(nèi)外誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的作用及可能機(jī)制。方法 Gen Bank獲取SjPrx編碼序列,設(shè)計(jì)合成引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增;構(gòu)建質(zhì)粒,通過轉(zhuǎn)化將構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞,然后小量擴(kuò)增菌株,電泳檢測(cè)克隆成功表達(dá)。蛋白質(zhì)印跡法(western blot,WB)驗(yàn)證融合蛋白后大量表達(dá)純化。將重組SjPrxⅠ通過腹腔注射BALB/c小鼠,本科聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測(cè)脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子。結(jié)果成功構(gòu)建了SjPrx I-p ET28a質(zhì)粒,經(jīng)異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)誘導(dǎo)表達(dá)后得到可溶性SjPrx I,純化后的SjPrxⅠ免疫小鼠,其淋巴細(xì)胞高水平表達(dá)Th2細(xì)胞分泌的IL-4(t=6.69,P0.001)、IL-10(z=3.18,P=0.001)和IL-13(t=4.21,P=0.001)。結(jié)論制備了重組SjPrx I,初步認(rèn)為其具有Th2型免疫調(diào)節(jié)功能,但并不能顯著抑制體內(nèi)業(yè)已存在的Th1的偏移。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;安徽省病原生物學(xué)省級(jí)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 血吸蟲 日本 過氧化物氧化還原蛋白 Th型免疫應(yīng)答
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81171606)
【分類號(hào)】：R383.24
【正文快照】： (Chin J Dis Control Prev 2015,19(8):835-838)血吸蟲病是一種廣泛流行于熱帶、亞熱帶國家的傳染性寄生蟲病,傳染人類的血吸蟲主要有三種,埃及血吸蟲、曼氏血吸蟲和日本血吸蟲,我國主要流行的是日本血吸蟲病[1]。血吸蟲早期感染以Th1反應(yīng)為主;血吸蟲尾蚴感染大約6周時(shí)雌蟲開

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