本文關鍵詞：中國中性粒細胞MPO完全缺陷家系的分子機制研究

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【摘要】：【目的】 通過對1個中性粒細胞髓過氧化物酶(Myeloperoxidase, MPO)完全缺陷家系進行系統(tǒng)的分子遺傳學研究，闡明中國MPO完全缺陷家系的分子遺傳學特征和MPO分子遺傳改變對其生理學、病理學作用的影響水平及其分子機制。為進一步開展MPO生物合成機制及其生理和病理學研究提供有力的試驗材料支持。 【方法】 1.收集家系血液樣本，分離中性粒細胞，并抽提基因組。設計引物擴增MPO基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)和12個外顯子區(qū)，分段擴增MPO基因。比較分析家系樣本與正常對照間基因序列差異，繪制家系圖。 2.對中性粒細胞內(nèi)MPO進行活性檢測、MPO細胞化學染色以及通過熒光顯微鏡觀察MPO熒光抗體與MPO的雜交信號，從而分析MPO缺陷中性粒細胞內(nèi)MPO的氧化活性、表達水平以及定位情況。聚丙烯酰胺凝膠電泳（Sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）分離中性粒細胞勻漿樣本，利用MPO抗體通過Western-Blot分析中性粒細胞中MPO的存在情況。 3.分別提取放線菌酮（Cycloheximide, CHX）處理前后中性粒細胞總RNA，利用real-time RT PCR技術(shù)檢測MPO mRNA相對正常對照的表達水平，研究此突變分子機制。 【結(jié)果】 1.通過對家系基因組序列分析，發(fā)現(xiàn)患者MPO基因11號外顯子第1805個堿基由G突變?yōu)锳（TGG TAG），提前產(chǎn)生終止密碼子，為W602X純合子；而其家庭成員中患者母親及兒子均為W602X雜合子，此位點為G/A。家系圖譜提示此缺陷為常染色體隱性遺傳。 2.患者中性粒細胞中MPO活性不到正常對照總量的5%、MPO化學染色完全陰性、熒光顯微鏡顯示MPO熒光染色陰性、Western-Blot顯示患者MPO完全缺陷，而正常對照染色陽性明顯�；颊吲畠号c兒子以上結(jié)果均接近正常對照一半。 3. Real-time RT PCR顯示患者中性粒細胞MPO mRNA表達水平不到正常對照1%，而中性粒細胞經(jīng)CHX處理后MPO mRNA表達水平明顯增高。提示中性粒細胞內(nèi)MPO mRNA存在降解，，而此降解和無義突變介導的mRNA降解（nonsense-mediated mRNAdecay, NMD)密切相關。 【結(jié)論】 本實驗發(fā)現(xiàn)MPO完全缺陷患者一例，缺陷為11號外顯子第1805位堿基G突變?yōu)锳（TGG TAG）所致(NG_009629.1:c.1805GA)，即W602X純合子突變。這一突變導致提前產(chǎn)生終止密碼子（premature termination codon, PTC)，繼而激活NMD使產(chǎn)生PTC的MPO mRNA降解，使MPO轉(zhuǎn)錄異常而導致完全缺陷。
【關鍵詞】：中性粒細胞 髓過氧化物酶 分子機制 完全缺陷
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 引言9-11
• 第一部分 基因水平分析 MPO 缺陷11-20
• 1 材料和方法11-15
• 2 結(jié)果15-19
• 3 討論19-20
• 第二部分 蛋白質(zhì)水平分析 MPO 缺陷20-31
• 1 材料和方法20-27
• 2 結(jié)果27-30
• 3 討論30-31
• 第三部分 RNA 水平分析 MPO 缺陷31-38
• 1 材料和方法31-35
• 2 結(jié)果35-37
• 3 討論37-38
• 總結(jié)38-39
• 參考文獻39-41
• 綜述 髓過氧化物酶功能的研究進展41-50
• 參考文獻47-50
• 致謝50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李衛(wèi)濱;朱忠勇;蘭小鵬;馬洪玉;;中性粒細胞髓過氧化物酶缺乏癥的實驗室診斷[J];臨床血液學雜志(輸血與檢驗版);2007年02期

2 胡浪;曹索奇;;用Word繪制家系圖[J];西南國防醫(yī)藥;2009年02期

3 王建中,李建英,普程偉,袁家穎,汪潤,楊宏云;白細胞髓過氧化物酶缺陷癥的實驗診斷[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2005年02期

本文編號：930059