本文關(guān)鍵詞：P38抑制劑體外對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的作用

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【摘要】：目的：本研究以體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對(duì)象，將不同濃度的P38抑制劑ML3403體外作用于細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，探討P38抑制劑ML3403體外對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的作用。 方法：從自然感染細(xì)粒棘球蚴病的綿羊肝臟內(nèi)采集細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，將其加入RPMI1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)，5d后，將原頭節(jié)分別加入不同濃度ML3403（12.5、25、50、80、100μmol/L）中體外孵育。每組加入原頭節(jié)約2000個(gè)。不同濃度ML3403作用不同時(shí)間，在光鏡下觀察原頭節(jié)的形態(tài)變化，同時(shí)利用伊紅染色的方法顯示原頭節(jié)的活力并繪制活力曲線；電子顯微鏡下觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)改變；用Western blot檢測(cè)原頭節(jié)內(nèi)p38蛋白表達(dá)水平；用Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原頭節(jié)內(nèi)caspase-3酶活性。 結(jié)果：孵育5d后，正常和DMSO對(duì)照組的原頭節(jié)形態(tài)和活力幾乎沒(méi)有改變，而50μmol/LML3403組原頭節(jié)活力下降約50.5%。通過(guò)伊紅染色觀察發(fā)現(xiàn)，隨著ML3403作用時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增加，ML3403對(duì)原頭節(jié)的生長(zhǎng)抑制作用越明顯。連續(xù)觀察5d，100μmol/LML3403組對(duì)原頭節(jié)有較強(qiáng)的殺傷作用，此時(shí)幾乎沒(méi)有存活的原頭節(jié)；80μmol/L和50μmol/LML3403組的頭節(jié)活力也分別僅為13.34±2.09%和49.5±1.88%。掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)ML3403作用初期，原頭節(jié)體表出現(xiàn)指狀突起、頂端體表出現(xiàn)皺縮，隨著作用時(shí)間和濃度的增加，漸出現(xiàn)頂突界面缺損，吸盤(pán)變形，蟲(chóng)體表面出現(xiàn)凹陷，指狀突起增多，甚至出現(xiàn)蟲(chóng)蝕樣損害。透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)原頭節(jié)體被合胞體帶變薄，結(jié)構(gòu)松散，囊泡擴(kuò)張，微毛減少，甚至消失；部分實(shí)質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)濃縮，細(xì)胞核核周隙增寬，核仁消失，核異染色質(zhì)凝集，邊緣化。Western bolt檢測(cè)顯示，ML3403可降低細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)p38蛋白表達(dá)水平。Caspase-3活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，較正常對(duì)照組，ML3403可使原頭節(jié)的caspase-3酶活性增加。 結(jié)論：P38抑制劑ML3403在體外有明顯的抗細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的作用，，有望成為一種新型的抗包蟲(chóng)藥物。
【關(guān)鍵詞】：P38抑制劑 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié) 體外實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R383.33
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料12-16
• 1. 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的收集12
• 2. 主要試劑12
• 3. 主要儀器設(shè)備12-13
• 4. 主要試劑配制13-16
• 方法16-21
• 1. 細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的分離及體外培養(yǎng)16
• 2. P38 抑制劑 ML3403 體外作用于細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)16
• 3. 倒置顯微鏡觀察 ML3403 體外對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)和活力的影響16
• 4. 掃描電子顯微鏡觀察 ML3403 作用后原頭節(jié)表面結(jié)構(gòu)的變化16
• 5. 透射電子顯微鏡觀察 ML3403 作用后原頭節(jié)內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化16-17
• 6. Western blot 檢測(cè) ML3403 作用后原頭節(jié)內(nèi) p38 蛋白表達(dá)水平17-18
• 7. Caspase-3 活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè) ML3403 作用后原頭節(jié)體內(nèi) caspase-3 酶活性18-20
• 8. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20-21
• 結(jié)果21-32
• 1. 光學(xué)倒置顯微鏡下觀察 ML3403 對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)的影響21-24
• 2. ML3403 對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)生長(zhǎng)的影響24-25
• 3. ML3403 對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)的影響25-28
• 4. ML3403 對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) p38 蛋白表達(dá)水平的影響28-31
• 5. ML3403 對(duì)細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) caspase-3 酶活性的影響31-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 文獻(xiàn)綜述39-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 致謝46-47
• 作者簡(jiǎn)歷47-48
• 導(dǎo)師評(píng)閱表48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：925385