本文關(guān)鍵詞：P38抑制劑體外對細粒棘球蚴原頭節(jié)的作用

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【摘要】：目的：本研究以體外培養(yǎng)的細粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象，將不同濃度的P38抑制劑ML3403體外作用于細粒棘球蚴原頭節(jié)，探討P38抑制劑ML3403體外對細粒棘球蚴原頭節(jié)的作用。 方法：從自然感染細粒棘球蚴病的綿羊肝臟內(nèi)采集細粒棘球蚴原頭節(jié)，將其加入RPMI1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)，5d后，將原頭節(jié)分別加入不同濃度ML3403（12.5、25、50、80、100μmol/L）中體外孵育。每組加入原頭節(jié)約2000個。不同濃度ML3403作用不同時間，在光鏡下觀察原頭節(jié)的形態(tài)變化，同時利用伊紅染色的方法顯示原頭節(jié)的活力并繪制活力曲線；電子顯微鏡下觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)改變；用Western blot檢測原頭節(jié)內(nèi)p38蛋白表達水平；用Caspase-3活性檢測試劑盒檢測原頭節(jié)內(nèi)caspase-3酶活性。 結(jié)果：孵育5d后，正常和DMSO對照組的原頭節(jié)形態(tài)和活力幾乎沒有改變，而50μmol/LML3403組原頭節(jié)活力下降約50.5%。通過伊紅染色觀察發(fā)現(xiàn)，隨著ML3403作用時間的延長和濃度的增加，ML3403對原頭節(jié)的生長抑制作用越明顯。連續(xù)觀察5d，100μmol/LML3403組對原頭節(jié)有較強的殺傷作用，此時幾乎沒有存活的原頭節(jié)；80μmol/L和50μmol/LML3403組的頭節(jié)活力也分別僅為13.34±2.09%和49.5±1.88%。掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)ML3403作用初期，原頭節(jié)體表出現(xiàn)指狀突起、頂端體表出現(xiàn)皺縮，隨著作用時間和濃度的增加，漸出現(xiàn)頂突界面缺損，吸盤變形，蟲體表面出現(xiàn)凹陷，指狀突起增多，甚至出現(xiàn)蟲蝕樣損害。透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)原頭節(jié)體被合胞體帶變薄，結(jié)構(gòu)松散，囊泡擴張，微毛減少，甚至消失；部分實質(zhì)細胞基質(zhì)濃縮，細胞核核周隙增寬，核仁消失，核異染色質(zhì)凝集，邊緣化。Western bolt檢測顯示，ML3403可降低細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi)p38蛋白表達水平。Caspase-3活性檢測發(fā)現(xiàn)，較正常對照組，ML3403可使原頭節(jié)的caspase-3酶活性增加。 結(jié)論：P38抑制劑ML3403在體外有明顯的抗細粒棘球蚴原頭節(jié)的作用，，有望成為一種新型的抗包蟲藥物。
【關(guān)鍵詞】：P38抑制劑 細粒棘球蚴原頭節(jié) 體外實驗
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R383.33
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料12-16
• 1. 細粒棘球蚴原頭節(jié)的收集12
• 2. 主要試劑12
• 3. 主要儀器設(shè)備12-13
• 4. 主要試劑配制13-16
• 方法16-21
• 1. 細粒棘球蚴原頭節(jié)的分離及體外培養(yǎng)16
• 2. P38 抑制劑 ML3403 體外作用于細粒棘球蚴原頭節(jié)16
• 3. 倒置顯微鏡觀察 ML3403 體外對細粒棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)和活力的影響16
• 4. 掃描電子顯微鏡觀察 ML3403 作用后原頭節(jié)表面結(jié)構(gòu)的變化16
• 5. 透射電子顯微鏡觀察 ML3403 作用后原頭節(jié)內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化16-17
• 6. Western blot 檢測 ML3403 作用后原頭節(jié)內(nèi) p38 蛋白表達水平17-18
• 7. Caspase-3 活性檢測試劑盒檢測 ML3403 作用后原頭節(jié)體內(nèi) caspase-3 酶活性18-20
• 8. 統(tǒng)計學方法20-21
• 結(jié)果21-32
• 1. 光學倒置顯微鏡下觀察 ML3403 對細粒棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)的影響21-24
• 2. ML3403 對細粒棘球蚴原頭節(jié)生長的影響24-25
• 3. ML3403 對細粒棘球蚴原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)的影響25-28
• 4. ML3403 對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) p38 蛋白表達水平的影響28-31
• 5. ML3403 對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) caspase-3 酶活性的影響31-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-39
• 文獻綜述39-46
• 參考文獻43-46
• 致謝46-47
• 作者簡歷47-48
• 導師評閱表48

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：925385