本文關(guān)鍵詞：低氧和糖皮質(zhì)激素上調(diào)巨噬細胞小G蛋白RhoB表達及其生物學意義的研究

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【摘要】：缺氧是臨床最常見的病理生理過程，全身性缺氧與高原性疾病、呼吸系統(tǒng)和心血管疾病等的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。而局部性缺氧常見于心腦血管的梗塞、炎癥和過度的組織增生（如腫瘤）等。低氧和炎癥常同時發(fā)生，低氧可以激活免疫細胞（巨噬細胞、樹突狀細胞和淋巴細胞），導致這些細胞基因表達和炎癥因子分泌的改變，從而參與炎癥反應(yīng)。這是低氧導致炎癥反應(yīng)和組織損傷的原因之一，也是導致腫瘤炎癥微環(huán)境的重要因素。糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoid, GC）是體內(nèi)最重要的應(yīng)激激素，已證實在低氧條件下GC分泌增多。糖皮質(zhì)激素受體（Glucocorticoid receptor,GR）是配體依賴性的轉(zhuǎn)錄因子，，GC能在GR介導下，通過調(diào)節(jié)基因表達，在低氧適應(yīng)及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮作用。但是目前已知的能介導低氧適應(yīng)和GC作用的靶基因還不多，進一步尋找這些靶基因?qū)τ陉U明低氧的適應(yīng)機制和GC的作用機制有重要意義。 RhoB是小G蛋白家族一個成員，主要存在于細胞的內(nèi)體（endosome），RhoB在GTP結(jié)合（活性態(tài)）和GDP結(jié)合（非活性態(tài)）之間轉(zhuǎn)換，與GTP結(jié)合的RhoB能激活下游的信號轉(zhuǎn)導通路，參與不同的細胞過程，如調(diào)節(jié)細胞的骨架重組和囊泡運輸，并作為腫瘤抑制蛋白，調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖、凋亡等過程。已知生長因子、細胞因子和基因毒應(yīng)激等可以快速上調(diào)RhoB的表達。國外有研究顯示，與野生型小鼠骨髓巨噬細胞相比，從RhoB基因敲除小鼠骨髓中分離的巨噬細胞（RhoB-/-）與玻璃板的粘附作用減弱，但遷移加快，提示RhoB參與調(diào)節(jié)巨噬細胞與基質(zhì)的粘附和遷移。我們前期的工作也發(fā)現(xiàn)GC能在包括巨噬細胞在內(nèi)的多種細胞中上調(diào)RhoB的表達，近期又發(fā)現(xiàn)低氧可以上調(diào)肺組織和A549細胞中RhoB的表達。但是低氧能否上調(diào)巨噬細胞的RhoB，RhoB是否參與了GC對巨噬細胞的作用還不清楚。本課題首先觀察了低氧單獨以及低氧和Dex聯(lián)合作用對RhoB表達的影響，在此基礎(chǔ)上進一步觀察了RhoB對巨噬細胞粘附和遷移行為的影響以及與Dex對巨噬細胞作用的關(guān)系，以進一步闡明RhoB在低氧適應(yīng)、巨噬細胞功能調(diào)節(jié)和GC效應(yīng)中可能的作用。 我們的工作發(fā)現(xiàn)，低氧可以上調(diào)大鼠脾臟組織以及小鼠腹腔巨噬細胞系RAW264.7細胞中RhoB mRNA和蛋白的表達。人工合成的糖皮質(zhì)激素-地塞米松（Dex）也能明顯誘導RAW264.7細胞RhoB表達，與低氧聯(lián)合處理細胞可使RhoB的表達進一步增加。采用siRNA干擾技術(shù)抑制RhoB表達可使巨噬細胞與培養(yǎng)板的粘附作用明顯減弱，而遷移增強，表明RhoB具有促進巨噬細胞粘附和抑制其遷移的作用。我們還發(fā)現(xiàn)，Dex具有促進巨噬細胞粘附和抑制其遷移的作用。抑制RhoB的表達可使Dex的上述作用減弱，表明Dex誘導RhoB表達介導了Dex促進巨噬細胞粘附和抑制其遷移的作用。另外，我們研究了常氧和低氧的條件下，RhoB的表達受到抑制后對巨噬細胞炎癥因子表達的影響，我們發(fā)現(xiàn)低氧可以上調(diào)巨噬細胞炎癥因子表達，同時無論在常氧還是低氧的條件下，RhoB的表達受到抑制后，IL-1β,IL-6,TNF-α的mRNA水平都是下降的，其中IL-1β,IL-6的mRNA表達明顯的降低，上述結(jié)果表明，RhoB參與到低氧促進巨噬細胞炎癥因子表達的過程中。
【關(guān)鍵詞】：低氧 糖皮質(zhì)激素 RhoB 巨噬細胞功能
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略語9-10
• 前言10-13
• 材料與試劑13-15
• 實驗方法15-22
• 實驗結(jié)果22-32
• 討論32-34
• 參考文獻34-37
• 小結(jié)和展望37-38
• 綜述38-44
• 參考文獻42-44
• 致謝44-46

【共引文獻】

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本文編號：924629