本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞微囊化緩釋LeftyA用于肺纖維化模型的治療研究

  更多相關(guān)文章： 肺纖維化 工程化細(xì)胞 LeftyA 細(xì)胞微囊化 緩釋

【摘要】：器官纖維化如肺纖維化、腎纖維化等是多種重大疾病的主要致因，嚴(yán)重威脅人類的生命健康。其中特發(fā)性肺纖維化（IPF）以成纖維細(xì)胞的異常增殖活化和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積為主要特點(diǎn)，它引發(fā)肺組織結(jié)構(gòu)的破壞進(jìn)而使得呼吸困難甚至衰竭，是臨床研究中仍然無法攻克的重大醫(yī)學(xué)難題。有研究發(fā)現(xiàn)，LeftyA蛋白是纖維化發(fā)展進(jìn)程中的關(guān)鍵因子。LeftyA作為TGF-的新型拮抗劑通過多種途徑阻斷TGF-信號通路。它能夠抑制由TGF-誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞EMT過程，因此具有抑制腎纖維化的潛能。此外，LeftyA蛋白還能夠促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶降解細(xì)胞外基質(zhì)而治療改善纖維化的狀況。因此，LeftyA成為一種潛在的抗纖維化蛋白藥物。 然而LeftyA蛋白主要表達(dá)在胚胎時期，在成體組織中表達(dá)量較低。本研究通過細(xì)胞微囊化技術(shù)包覆工程化細(xì)胞以緩釋LeftyA進(jìn)行治療纖維化的嘗試。本文以氣管注射博來霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型和TGF-誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞EMT模型為基礎(chǔ)，分別研究緩釋LeftyA對于纖維化治療的效果和作用機(jī)制。 緩釋治療小鼠肺纖維化模型后，分別檢測組織了形態(tài)學(xué)變化、膠原以及結(jié)締組織生長因子基因的表達(dá)量變化、以及金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)量變化。研究發(fā)現(xiàn)，與博來霉素對照組相比，緩釋LeftyA能夠顯著改善肺纖維化狀況，顯著提高M(jìn)MP-9的表達(dá)量；然而緩釋LeftyA作用于肺泡上皮細(xì)胞的纖維化模型時，發(fā)現(xiàn)它不能抑制和逆轉(zhuǎn)EMT過程，盡管如此LeftyA能夠顯著降低成纖維細(xì)胞線粒體膜電位，增強(qiáng)Caspase3/7活性，從而促進(jìn)纖維化模型細(xì)胞的凋亡。 對于LeftyA作用的分子機(jī)制研究表明，，細(xì)胞微囊化緩釋LeftyA能夠提高M(jìn)MP-9的表達(dá)量，增強(qiáng)細(xì)胞外基質(zhì)的降解從而達(dá)到改善小鼠肺纖維化的水平。除此之外，LeftyA也可能通過促進(jìn)成纖維細(xì)胞的凋亡達(dá)到改善肺纖維化進(jìn)程。本課題基于肺纖維化模型，提出了細(xì)胞微囊化緩釋LeftyA治療肺纖維化的策略，它為肺纖維化乃至多種其他器官纖維化的治療開辟新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：肺纖維化 工程化細(xì)胞 LeftyA 細(xì)胞微囊化 緩釋
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563.8;R965;R-332
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第1章 緒論8-20
• 1.1 課題研究背景和意義8
• 1.2 肺纖維化研究現(xiàn)狀8-12
• 1.2.1 肺纖維化概念及其致病機(jī)理8-9
• 1.2.2 肺纖維化的治療方法和策略9-10
• 1.2.3 EMT 與肺纖維化的關(guān)系10-12
• 1.3 Lefty 蛋白在器官纖維化中的運(yùn)用12-15
• 1.3.1 Lefty 蛋白與 TGF-beta 信號通路12-13
• 1.3.2 Lefty 蛋白在 EMT 過程中的研究13-14
• 1.3.3 Lefty 蛋白與 ECM、MMP 的關(guān)系14-15
• 1.4 細(xì)胞微囊化緩釋技術(shù)與疾病治療15-19
• 1.4.1 細(xì)胞微囊化緩釋技術(shù)15-17
• 1.4.2 細(xì)胞微囊化與疾病治療17-19
• 1.5 本課題主要研究內(nèi)容19-20
• 1.5.1 微囊緩釋 LeftyA 治療小鼠肺纖維化的有效性研究19
• 1.5.2 微囊緩釋 LeftyA 治療肺纖維化的機(jī)理研究19
• 1.5.3 技術(shù)路線19-20
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和方法20-28
• 2.1 材料20-23
• 2.1.1 細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)動物20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.1.3 主要溶液配制方法21-22
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-27
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.2.2 肺泡上皮細(xì)胞 EMT 誘導(dǎo)23
• 2.2.3 小鼠肺纖維化模型制備23
• 2.2.4 海藻酸鈉細(xì)胞包覆23-24
• 2.2.5 蛋白免疫印跡（western blot）24
• 2.2.6 實(shí)時定量 PCR 技術(shù)分析特定基因表達(dá)量24-25
• 2.2.7 組織石蠟切片染色25
• 2.2.8 免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測金屬蛋白酶表達(dá)25-26
• 2.2.9 細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測特定蛋白表達(dá)26
• 2.2.10 線粒體膜電位檢測26
• 2.2.11 掃描電子顯微鏡技術(shù)觀察細(xì)胞微囊超微結(jié)構(gòu)26
• 2.2.12 酶聯(lián)免疫法檢測 LeftyA26-27
• 2.3 本章小結(jié)27-28
• 第3章 微囊緩釋 LeftyA 治療小鼠肺纖維化的有效性研究28-42
• 3.1 引言28
• 3.2 工程化 HEK293 細(xì)胞的微囊化包覆研究28-31
• 3.2.1 工程化 HEK293 細(xì)胞的鑒定28-29
• 3.2.2 海藻酸鈉細(xì)胞微囊制作及表征29-31
• 3.3 博來霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型的研究31-32
• 3.4 微囊化緩釋 LeftyA 對小鼠肺纖維化治療的有效性研究32-38
• 3.4.1 血清中緩釋的 LeftyA 含量分析32-33
• 3.4.2 緩釋治療后的組織形態(tài)學(xué)分析33-35
• 3.4.3 緩釋 LeftyA 對結(jié)締組織生長因子和膠原基因的影響35
• 3.4.4 緩釋 LeftyA 對組織中金屬蛋白酶表達(dá)量的影響35-38
• 3.5 討論38-41
• 3.6 本章小結(jié)41-42
• 第4章 微囊緩釋 LeftyA 治療肺纖維化的機(jī)制研究42-53
• 4.1 引言42
• 4.2 肺泡上皮細(xì)胞纖維化模型的研究42-45
• 4.3 LeftyA 對肺上皮細(xì)胞纖維化模型的抑制和逆轉(zhuǎn)研究45-46
• 4.4 LeftyA 對促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞纖維化模型的凋亡研究46-49
• 4.4.1 LeftyA 促進(jìn)纖維化模型細(xì)胞的凋亡46-48
• 4.4.2 LeftyA 對纖維化模型細(xì)胞的線粒體膜電位影響48
• 4.4.3 LeftyA 對纖維化模型細(xì)胞的 Caspase3/7 活性影響48-49
• 4.5 討論49-52
• 4.6 本章小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 展望54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文62-64
• 致謝64

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2 楊s

本文編號：922763