發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 06:27

  本文關(guān)鍵詞：橫川后殖吸蟲與扇棘單睪吸蟲雙重PCR鑒別方法的建立

  更多相關(guān)文章： 橫川后殖吸蟲 扇棘單睪吸蟲 雙重PCR 鑒別

【摘要】：目的建立一種能快速鑒定橫川后殖吸蟲(Metagonimus yokogawai)和扇棘單睪吸蟲(Haplorchis taichui)的雙重PCR方法。方法從Gen Bank中獲取橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲以及與其同源性較高的蟲種的核糖體DNA第一內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS1)序列,應(yīng)用Primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物,并優(yōu)化PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,建立雙重PCR法。將橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲與17個(gè)相關(guān)蟲種一起進(jìn)行PCR擴(kuò)增,檢測(cè)方法的特異性。橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲的ITS1擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)p MD19-T載體進(jìn)行TA克隆獲得質(zhì)粒,并將質(zhì)粒進(jìn)行梯度稀釋,檢測(cè)其敏感性。應(yīng)用新建的雙重PCR法鑒定從47副貓內(nèi)臟和40副犬內(nèi)臟中收集的吸蟲,檢測(cè)該方法的準(zhǔn)確性和實(shí)用性。結(jié)果新建的雙重PCR法能擴(kuò)增出橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲的目的片段,大小分別為648 bp和279 bp,不與鉤棘單睪吸蟲、華支睪吸蟲、心形咽口吸蟲、次睪屬吸蟲囊蚴、外睪屬吸蟲囊蚴、藐小棘隙吸蟲、抱莖棘隙吸蟲、弗氏棘口吸蟲、似錐低頸吸蟲、全冠屬吸蟲、重盤屬吸蟲、異尖屬線蟲、東方次睪吸蟲、衛(wèi)氏并殖吸蟲、瓦氏瓦生吸蟲、背孔屬吸蟲和宮脂屬線蟲的DNA發(fā)生交叉擴(kuò)增,具有較好的特異性。敏感性試驗(yàn)表明,應(yīng)用該雙重PCR法,2類吸蟲DNA的最低檢測(cè)值分別為1.49×10-1pg和1.14×10-1pg。對(duì)來自貓內(nèi)臟和犬內(nèi)臟的吸蟲檢測(cè)表明,該方法能夠區(qū)分橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲,并且不與貓、狗中其他的吸蟲DNA發(fā)生交叉擴(kuò)增。結(jié)論本研究所建立的雙重PCR法可用于快速鑒定橫川后殖吸蟲和扇棘單睪吸蟲。
【作者單位】： 廣西大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;上海出入境檢驗(yàn)檢疫局;廣西大學(xué)食品安全研究中心;羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 橫川后殖吸蟲 扇棘單睪吸蟲 雙重PCR 鑒別
【基金】：上海出入境檢驗(yàn)檢疫局科研項(xiàng)目(No.HK002-2014) 國家質(zhì)檢總局科技專項(xiàng)(No.2010IK013)~~
【分類號(hào)】：R383.2
【正文快照】： (1 College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Nanning 530004,China;2 ShanghaiEntry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People’s Republic of China,Shanghai 200135,China;3 Research Center of Food Quality and Safety,Guangxi Univer

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊益超;李樹林;譚裕光;K.S.Eom;許洪波;吳欽華;區(qū)方奇;商少明;;廣西肝吸蟲流行區(qū)人群及淡水魚扇棘單睪吸蟲感染調(diào)查[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年02期

2 楊吝;亞洲水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)狀[J];海洋信息;1995年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊益超;黎學(xué)銘;趙同領(lǐng);李樹林;許洪波;吳欽華;商少明;謝祖英;區(qū)方奇;黃鏗凌;麥富珍;;廣西扇棘單睪吸蟲5.8S rRNA序列及二級(jí)結(jié)構(gòu)的研究[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2007年04期

2 楊益超;李樹林;譚裕光;K.S.Eom;許洪波;吳欽華;區(qū)方奇;商少明;;廣西肝吸蟲流行區(qū)人群及淡水魚扇棘單睪吸蟲感染調(diào)查[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年02期

3 張鴻滿;吳慧芳;江河;黃維義;譚裕光;黃福明;黎學(xué)銘;張陸娟;歐陽頤;;廣西市售部分水產(chǎn)品中顎口線蟲感染情況調(diào)查研究[J];應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年04期

4 Thapana Chontananarth;Chalobol Wongsawad;;Epidemiology of cercarial stage of trematodes in freshwater snails from Chiang Mai province,Thailand[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2013年03期

5 黃慶梅;盧毅;;廣西橫縣集貿(mào)市場(chǎng)淡水魚蝦華支睪吸蟲囊蚴感染調(diào)查[J];河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

6 張鴻滿;江河;吳惠芳;譚春萍;徐冰;譚裕光;黃福明;張陸娟;;廣西東方次睪吸蟲疫源地調(diào)查[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

7 程由注，許國防，林金祥，郭忠福，馮珍海，方彥炎，陳寶健;臺(tái)灣棘帶吸蟲生物學(xué)及流行病學(xué)研究[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1996年01期

8 程由注，許國防，郭忠福，曾海勇，馮珍海許賢讓，鄭國斌，林金祥;人體自然感染鉤棘單睪吸蟲及其魚類宿主調(diào)查[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1996年03期

9 黃慶梅;;廣西橫縣集貿(mào)市場(chǎng)淡水魚蝦華支睪吸蟲囊蚴感染調(diào)查[J];口岸衛(wèi)生控制;2009年04期

10 邢延芳,屈玲,李紅麗;糞檢驗(yàn)將靈芝孢子誤診為異形吸蟲卵[J];臨床誤診誤治;2004年10期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 趙同領(lǐng);廣西扇棘單睪吸蟲5.8S rRNA序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

2 段柳春;湖南省黃鱔體內(nèi)胃瘤線蟲感染調(diào)查及遺傳特異性研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 李雯雯;上海、廣州等地市售與上海入境黃鱔、泥鰍中顎口線蟲調(diào)查與分類鑒定[D];廣西大學(xué);2012年

4 鄧雅麗;吡喹酮治療華支睪吸蟲病的臨床分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

5 戴婷婷;云南大理州并殖吸蟲的病原學(xué)及分子系統(tǒng)學(xué)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

6 呂國麗;蟲卵ITS-2基因序列鑒別華支睪吸蟲與扇棘單睪吸蟲研究及應(yīng)用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

7 張偉琴;云南省并殖吸蟲第二中間宿主溪蟹的調(diào)查研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

8 那璐;東方次睪吸蟲分子種系發(fā)生及PCR檢測(cè)方法的建立[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2015年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 裘明華;蔣玉燕;;人舌形蟲病的研究進(jìn)展[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;2006年06期

2 張鴻滿,李順玉,黎學(xué)銘,洪性臺(tái);組胺H_2受體抑制劑西米替丁對(duì)大白鼠抵抗華支睪吸蟲再感染拮抗作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];廣西預(yù)防醫(yī)學(xué);2005年01期

3 何剛，韋美壁，，李樹林，朱群友;廣西發(fā)現(xiàn)臺(tái)灣棘帶吸蟲感染一例[J];廣西預(yù)防醫(yī)學(xué);1995年04期

4 楊代勤;陳芳;蘇應(yīng)兵;楊麗麗;;黃鱔體內(nèi)寄生蟲感染的初步研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年11期

5 裘明華,董旦君;舌形蟲和舌形蟲病[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào);1998年02期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 蔡之宣,于小明,崔昱;黑龍江短溝蜷充作橫川后殖吸蟲中間宿主的調(diào)查[J];寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1990年04期

2 姚立農(nóng),陳瓊,張作忠,許寶爐,葉菊蓮,雷昌球;浙江省首例人體感染橫川后殖吸蟲的報(bào)告[J];寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;1991年S1期

3 姚立農(nóng);陳瓊;張作忠;許寶爐;葉菊蓮;雷昌球;;浙江發(fā)現(xiàn)人體感染橫川后殖吸蟲1例[J];中國寄生蟲病防治雜志;1991年02期

4 蔣則孝;生藥加麻拉驅(qū)除橫川后殖吸蟲的有效成分的研究[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(寄生蟲病分冊(cè));1978年04期

5 蔡之宣，于小明，崔昱;橫川后殖吸蟲中間宿主初步實(shí)驗(yàn)觀察[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;1996年04期

6 ;[J];;年期

本文編號(hào)：921968