發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 00:11

  本文關(guān)鍵詞：PDIA3對結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 短腸綜合征 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶 轉(zhuǎn)染 增殖 凋亡 結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞

【摘要】：目的： 研究USBS結(jié)腸代償中PDIA3對結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響 方法： 本課題組前期通過建立USBS大鼠模型，運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對USBS大鼠、正常大鼠和假手術(shù)組大鼠的結(jié)腸粘膜進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了USBS組和其他兩組之間存在蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3（PDIA3）、丙酮酸激酶M1/M2等十余種差異蛋白質(zhì)。本研究首先構(gòu)建pcDNA3.1/hisB-hPDIA3真核表達(dá)載體，將PDIA3表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的SW480細(xì)胞中，運(yùn)用Western blotting驗(yàn)證PDIA3在SW480細(xì)胞中的表達(dá)情況。然后按照不同的轉(zhuǎn)染劑量將PDIA3轉(zhuǎn)染到SW480細(xì)胞中，運(yùn)用MTT法，檢測PDIA3對SW480細(xì)胞增殖的作用，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測PDIA3對SW480細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果： 通過DNA測序證實(shí)，克隆到pcDNA3.1/hisB載體上的PDIA3序列除148bp-1694bp之間的序列中兩位點(diǎn)外，其余序列與參考序列完全相同。因此認(rèn)為成功、正確的構(gòu)建了質(zhì)粒pcDNA3.1/hisB-hPDIA3。利用脂質(zhì)體按照不同的轉(zhuǎn)染劑量和轉(zhuǎn)染時(shí)間，將pcDNA3.1/hisB-hPDIA3轉(zhuǎn)染至SW480細(xì)胞，提取轉(zhuǎn)染后的SW480細(xì)胞蛋白，并運(yùn)用Western blotting驗(yàn)證蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示四個(gè)轉(zhuǎn)染組均出現(xiàn)相應(yīng)的蛋白質(zhì)表達(dá)條帶，但24h高劑量轉(zhuǎn)染組，蛋白質(zhì)表達(dá)最顯著。按照上述的轉(zhuǎn)染劑量，對SW480細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，24h后分別經(jīng)過MTT法和流式細(xì)胞技術(shù)檢測PDIA3對SW480細(xì)胞增殖和凋亡的影響。MTT結(jié)果顯示，三個(gè)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的吸光值（OD）值均高于空白對照組，且三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，隨著轉(zhuǎn)染劑量的增加，細(xì)胞的吸光值增加，，表明轉(zhuǎn)染PDIA3劑量越大，細(xì)胞增殖愈明顯。流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率均低于空白對照組，且三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的凋亡率和轉(zhuǎn)染劑量成反比。 結(jié)論： 1．成功地構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1/hisB-hPDIA3，并且所構(gòu)建的質(zhì)粒能在SW480細(xì)胞有效表達(dá)，確定了轉(zhuǎn)染的最佳時(shí)間和最佳劑量。 2．PDIA3過表達(dá)能有效促進(jìn)SW480細(xì)胞增殖，而抑制其凋亡。
【關(guān)鍵詞】：短腸綜合征 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶 轉(zhuǎn)染 增殖 凋亡 結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 前言7-11
• 材料和方法11-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 附錄 146-47
• 附錄 247-48
• 綜述48-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：920356