本文關(guān)鍵詞：比較T7E1和Surveyor核酸內(nèi)切酶對于點突變的檢測效率

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【摘要】：目的:比較T7E1和Surveyor核酸內(nèi)切酶對于CRISPR-Cas9引起的點突變的錯配剪切活性。方法:利用野生型和點突變的基因組DNA為模板,PCR擴增出突變位置的基因片段,用不同比例的野生型和點突變的PCR產(chǎn)物進行DNA雜交,分別用T7E1和Surveyor核酸內(nèi)切酶對雜交后的產(chǎn)物進行切割,瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果。結(jié)果:當(dāng)5%點突變DNA與95%野生型DNA雜交時,T7E1核酸內(nèi)切酶剪切雜交產(chǎn)物的比例為9.5%,Surveyor核酸內(nèi)切酶為3.2%;當(dāng)點突變DNA與野生型DNA等比例雜交時,T7E1核酸內(nèi)切酶剪切雜交產(chǎn)物的比例為45.6%,Surveyor核酸內(nèi)切酶為26.4%;且T7E1和Surveyor核酸內(nèi)切酶均能檢測5%的突變DNA。結(jié)論:T7E1核酸內(nèi)切酶檢測點突變的效率高于Surveyor。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： TE Surveyor 點突變 雜交 錯配剪切活性
【基金】：2011年度留學(xué)人員科技活動擇優(yōu)資助項目(No.人社廳函[2011]508號)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 基因編輯在近十幾年成為一項新興且熱門的技術(shù),ZFNs,TALENS,CRISPR-Cas9技術(shù)都是利用核酸酶特異性切割目的基因序列[1]。被切開的DNA序列引發(fā)基因的損傷修復(fù)機制,非同源修復(fù)多為堿基的丟失、插入,同源修復(fù)需要特定的DNA模版,最終導(dǎo)致基因突變[2,3]。隨著基因編輯技術(shù)的發(fā)展,快，

本文編號：920073