發(fā)布時間：2017-09-25 18:00

  本文關鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護作用初步研究

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【摘要】：目的:構建B群腦膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMB0315真核表達重組質粒,檢測其誘導小鼠產(chǎn)生的特異性體液免疫和細胞免疫應答水平、免疫血清體外殺菌效果及免疫保護作用,初步探討NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護效果,為研制一種新的預防B群流腦的核酸疫苗提供實驗依據(jù)。方法:以B群腦膜炎奈瑟菌標準株MC58基因組DNA為模板設計引物,PCR擴增NMB0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)真核表達載體中,經(jīng)Bam HⅠ和XhoⅠ雙酶切及測序鑒定重組質粒。構建成功的pc DNA3.1(+)/NMB0315重組質粒轉染COS-7細胞和RAW264.7細胞,免疫細胞化學染色法和Western blot法檢測重組蛋白在真核細胞中的表達。大量提取重組質粒,肌注免疫BALB/c小鼠,檢測小鼠體內(nèi)抗NMB0315的特異性體液免疫和細胞免疫水平;測定免疫血清體外殺菌滴度,觀察核酸疫苗對實驗小鼠的免疫保護效果。結果:構建的核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315能夠在真核細胞中有效轉錄和表達;免疫小鼠后能誘導產(chǎn)生特異性體液免疫應答和細胞免疫應答。在疫苗免疫后的2、4、6周,pc DNA3.1(+)/NMB0315組和pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G組血清總Ig G及Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3亞類抗體水平呈遞增趨勢,均明顯高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G對照組(P0.001);小鼠血清Ig G2a/Ig G1比值均小于1;生殖道灌洗液中特異性s Ig A水平均明顯高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G對照組(P0.01)。免疫第6周,脾淋巴細胞刺激指數(shù)(SI)均明顯高于對照組(P0.01,P0.01,P0.05)。pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G、pc DNA3.1(+)/NMB0315疫苗組免疫血清補體介導的體外殺菌效價分別為1∶128和1∶64;在致死量B群腦膜炎奈瑟菌MC58攻擊后72 h存活率分別為70%和65%,對照組[PBS,pc DNA3.1(+),Cp G]72 h存活率為0。結論:NMB0315核酸疫苗能夠誘導小鼠產(chǎn)生較高水平的體液免疫(包括黏膜免疫)和細胞免疫應答;免疫血清補體介導的體外殺菌活性較高;NMB0315核酸疫苗對感染B群腦膜炎奈瑟菌小鼠具有較強的免疫保護作用。
【作者單位】： 南華大學病原生物學研究所;
【關鍵詞】： B群腦膜炎奈瑟菌 B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白 核酸疫苗 免疫活性 免疫保護
【基金】：國家自然科學基金(No.81172890) 特殊病原體防控湖南省重點實驗室(湘科計字2014-5號;湘教通2012-312號) 湖南省重點學科建設項目資助
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 1本文為國家自然科學基金(No.81172890)、特殊病原體防控湖南省重點實驗室(湘科計字2014-5號;湘教通2012-312號)及湖南省重點學科建設項目資助。腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm),通常被稱為腦膜炎球菌,是流行性腦脊髓膜炎(簡稱流腦)的病原體。該菌經(jīng)呼吸道傳播且以人

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