本文關(guān)鍵詞：B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護(hù)作用初步研究

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【摘要】：目的:構(gòu)建B群腦膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMB0315真核表達(dá)重組質(zhì)粒,檢測其誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平、免疫血清體外殺菌效果及免疫保護(hù)作用,初步探討NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保護(hù)效果,為研制一種新的預(yù)防B群流腦的核酸疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:以B群腦膜炎奈瑟菌標(biāo)準(zhǔn)株MC58基因組DNA為模板設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增NMB0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)真核表達(dá)載體中,經(jīng)Bam HⅠ和XhoⅠ雙酶切及測序鑒定重組質(zhì)粒。構(gòu)建成功的pc DNA3.1(+)/NMB0315重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)染色法和Western blot法檢測重組蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)。大量提取重組質(zhì)粒,肌注免疫BALB/c小鼠,檢測小鼠體內(nèi)抗NMB0315的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫水平;測定免疫血清體外殺菌滴度,觀察核酸疫苗對實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫保護(hù)效果。結(jié)果:構(gòu)建的核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315能夠在真核細(xì)胞中有效轉(zhuǎn)錄和表達(dá);免疫小鼠后能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。在疫苗免疫后的2、4、6周,pc DNA3.1(+)/NMB0315組和pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G組血清總Ig G及Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3亞類抗體水平呈遞增趨勢,均明顯高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G對照組(P0.001);小鼠血清Ig G2a/Ig G1比值均小于1;生殖道灌洗液中特異性s Ig A水平均明顯高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G對照組(P0.01)。免疫第6周,脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(SI)均明顯高于對照組(P0.01,P0.01,P0.05)。pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G、pc DNA3.1(+)/NMB0315疫苗組免疫血清補(bǔ)體介導(dǎo)的體外殺菌效價分別為1∶128和1∶64;在致死量B群腦膜炎奈瑟菌MC58攻擊后72 h存活率分別為70%和65%,對照組[PBS,pc DNA3.1(+),Cp G]72 h存活率為0。結(jié)論:NMB0315核酸疫苗能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高水平的體液免疫(包括黏膜免疫)和細(xì)胞免疫應(yīng)答;免疫血清補(bǔ)體介導(dǎo)的體外殺菌活性較高;NMB0315核酸疫苗對感染B群腦膜炎奈瑟菌小鼠具有較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用。
【作者單位】： 南華大學(xué)病原生物學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： B群腦膜炎奈瑟菌 B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白 核酸疫苗 免疫活性 免疫保護(hù)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81172890) 特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(湘科計(jì)字2014-5號;湘教通2012-312號) 湖南省重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目資助
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 1本文為國家自然科學(xué)基金(No.81172890)、特殊病原體防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(湘科計(jì)字2014-5號;湘教通2012-312號)及湖南省重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目資助。腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm),通常被稱為腦膜炎球菌,是流行性腦脊髓膜炎(簡稱流腦)的病原體。該菌經(jīng)呼吸道傳播且以人

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