本文關(guān)鍵詞：不同供者來源臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性差異的初步研究

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【摘要】：目的： 體外分離、培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilical Cord derived mesenchymal stem cells, UC-MSCs),并檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309(血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2,VEGFR2,Flk-1)的表達(dá),細(xì)胞分泌肝細(xì)胞生長因子(HGF)和前列腺素E2(PGE2)的量,分別分析它們與供者信息：產(chǎn)婦年齡、孕周、胎兒體重和性別的相關(guān)性。 方法： 無菌條件下收集健康胎兒臍帶,采用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)UC-MSCs,并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測收獲細(xì)胞數(shù)量,繪制生長曲線,流式細(xì)胞儀檢測免疫表型,成骨成脂誘導(dǎo)分化鑒定。 流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng)的82份P1代細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309表達(dá)。隨機(jī)抽取15份UC-MSCs傳代培養(yǎng)至P11代。ELISA法分別檢測P1、P3、P5、P7、P10和P11代UC-MSCs培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子HGF和PGE2的含量。 隨機(jī)抽取28份UC-MSCs擴(kuò)增培養(yǎng),P2代細(xì)胞接種后培養(yǎng)48小時(shí)收獲,細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測細(xì)胞數(shù)量,分析細(xì)胞增殖能力和供者信息(產(chǎn)婦年齡、孕周、胎兒體重、性別和分娩方式)的相關(guān)性。 結(jié)果： 培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長,呈梭形或紡錘形,傳代細(xì)胞形態(tài)均一,可連續(xù)傳至15代以上。通過檢測原代,P3代,P10代細(xì)胞在不同生長時(shí)間細(xì)胞增殖量,繪制出生長曲線。P1代、P3代和P7代UC-MSCs的細(xì)胞表型均為CD90+/CD105+/CD166+/CD14-/CD34-/CD45-/CD79a-/HLA-DR-。P3代細(xì)胞分別通過成骨和成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng),誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。 不同供者來源UC-MSCs的P1代細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309表達(dá)范圍為0%-16.0%(n=82),P1代細(xì)胞CD309表達(dá)率越高,其細(xì)胞增殖倍數(shù)越高。P3代上清中HGF和PGE2含量分別為26029±11680(Pg/ml).3046±841(pg/ml)(n=15),P5代上清中HGF和PGE2含量分別為11660±5137(pg/ml).2396±569(pg/ml)(n=15)。從P1代傳代培養(yǎng)至P11代,細(xì)胞培養(yǎng)上清中HGF含量隨傳代次數(shù)降低,PGE2含量無顯著性變化。 擴(kuò)增培養(yǎng)28份UC-MSCs獲得細(xì)胞增殖倍數(shù),分析發(fā)現(xiàn)：產(chǎn)婦年齡24—26歲組增殖倍數(shù)為4.39±1.15,比31—41歲組增殖倍數(shù)2.99±0.75高；男性胎兒增殖倍數(shù)為3.92±1.17,比女性胎兒增殖倍數(shù)3.03±0.87高；胎兒體重3.5kg組增殖倍數(shù)為3.89±0.92,比≥3.5kg組增殖倍數(shù)2.87±1.19高；細(xì)胞增殖能力均是前者強(qiáng)于后者；孕周和分娩方式的不同細(xì)胞增殖能力無顯著性差異。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)成功分離培養(yǎng)出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,并傳代擴(kuò)增。不同供者來源UC-MSCs細(xì)胞表面標(biāo)志物CD309表達(dá)存在差異,高表達(dá)CD309的UC-MSCs細(xì)胞增殖能力更強(qiáng)。不同供者來源UC-MSCs分泌HGF和PEG2的量也有較大差異。隨傳代次數(shù)增加,細(xì)胞分泌的HGF量降低,P5代出現(xiàn)急劇下降,而PGE2量無明顯變化。產(chǎn)婦年齡較小、胎兒體重較輕的男性胎兒的UC-MSCs細(xì)胞增殖能力更強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞增殖能力 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2 肝細(xì)胞生長因子 前列腺素E2
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 一、前言9-12
• 二、材料與方法12-20
• （一）材料12-14
• （二） 方法14-20
• 三、結(jié)果20-32
• 四、討論32-35
• 五、結(jié)論35-36
• 六、參考文獻(xiàn)36-42
• 七、綜述42-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 發(fā)表文獻(xiàn)48-49
• 獲得專利49-54
• 八、致謝54-55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號(hào)：911640