本文關鍵詞：結核分枝桿菌國際標準強毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶體系統(tǒng)Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突變株的構建

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【摘要】：目的利用SOE-PCR技術和T載體技術,快速構建結核分枝桿菌國際標準強毒株H37Rv菌株Pup-蛋白酶體系統(tǒng)Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突變株,為進一步研究結核分枝桿菌Pup-蛋白酶體系統(tǒng)的功能奠定基礎。方法基于同源重組原理,利用SOE-PCR技術和T載體技術分別將各待缺失基因的上下游同源臂與卡那霉素抗性基因融合,構建各基因缺失突變盒;將各基因缺失突變盒與T-Vector pMD 19(Simple)相連接,構建各基因缺失突變自殺載體;利用電穿孔技術將各載體轉入H37Rv菌株,通過篩選陽性克隆、菌落PCR鑒定、DNA測序及遺傳穩(wěn)定性檢測,獲得各目的基因的缺失突變株。結果成功構建了帶有1 601bp的特異性置換片段Pup-N-K和1 591bp的特異性置換片段K-Pup-C的Pup基因缺失突變株H37Rv△Pup,帶有1 604bp的特異性置換片段Mpa-N-K和1 602bp的特異性置換片段K-Mpa-C的Mpa基因缺失突變株H37Rv△Mpa,帶有1 515bp的特異性置換片段Dop-N-K和1509bp的特異性置換片段K-Dop-C的Dop基因缺失突變株H37Rv△Dop及帶有1 590bp的特異性置換片段PafA-N-K和1 584bp的特異性置換片段K-PafA-C的PafA基因缺失突變株H37Rv△PafA,且各突變株均具有良好的遺傳穩(wěn)定性。結論利用SOE-PCR技術和T載體技術可以快速構建結核分枝桿菌基因缺失突變株,依據(jù)此方法成功構建了H37Rv菌株Pup-蛋白酶體系統(tǒng)Pup基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突變株,為進一步研究結核分枝桿菌Pup-蛋白酶體系統(tǒng)的功能奠定了基礎。
【作者單位】： 石河子大學醫(yī)學院病理生理學教研室 石河子大學"新疆地方與民族高發(fā)病"教育部重點實驗室;石河子市人民醫(yī)院老年病一科;
【關鍵詞】： 結核分枝桿菌 Pup-蛋白酶體系統(tǒng) 缺失突變株 構建
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81260261,81160192) 新疆生產(chǎn)建設兵團醫(yī)藥專項資金項目(No.2012BA022)
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起結核病這一嚴重威脅人類健康的傳染病的病原體。全世界約有1/3的人感染MTB[1]。近年來由于耐藥MTB的出現(xiàn),加之MTB與艾滋病病毒雙重感染疫情的上升,使得全球結核病防治形勢變得十分嚴峻[2]。一直以來,關于MTB的致病機理及耐

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1 何亞軍;霍亂弧菌的限制核酸內(nèi)切酶缺失突變株可用作菌苗[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;1986年01期

2 歐陽謙;馬文麗;劉翠華;鄭文嶺;;PhoB缺失突變株的構建及其性狀的初步研究[J];廣東醫(yī)學;2006年01期

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1 劉翠華;人粘膜病原微生物的分子致病機理及分子診斷學研究[D];第一軍醫(yī)大學;2005年

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本文編號：904185