本文關(guān)鍵詞：拉喹莫德對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的防治作用及其免疫學(xué)機(jī)制研究

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【摘要】：目的：研究拉喹莫德（LQ）對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）的防治作用，探討LQ對(duì)EAE防治作用的免疫學(xué)機(jī)制。方法：將75只雌性Wistar大鼠隨機(jī)分成5組：正常對(duì)照組、EAE對(duì)照組、LQ低劑量組、LQ中劑量組、LQ高劑量組，每組動(dòng)物均15只。在造模開(kāi)始的前三天，即對(duì)LQ低、中、高劑量組進(jìn)行干預(yù)，分別予以L(fǎng)Q0.03mg/kg·d、0.06mg/kg·d、0.12mg/kg·d灌胃，正常對(duì)照組及EAE對(duì)照組予以生理鹽水2ml/d灌胃。后使用粗制髓鞘堿性蛋白（MBP）加完全弗式佐劑皮下注射制作EAE模型，正常對(duì)照組皮下注射等量完全福氏佐劑。在造模后繼續(xù)對(duì)LQ各劑量組進(jìn)行治療，連續(xù)一周。每天對(duì)各組Wistar大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分及記錄，以神經(jīng)功能障礙評(píng)分連續(xù)三天無(wú)加重、四肢癱瘓或?yàn)l臨死亡時(shí)作為發(fā)病高峰期。同時(shí)記錄Wistar大鼠的發(fā)病潛伏期和進(jìn)展期。在發(fā)病高峰期處死動(dòng)物，未發(fā)病和正常對(duì)照組在造模4周后處死。留取大鼠腦脊髓組織、眶靜脈血和脾臟組織。大鼠腦脊髓組織作HE染色后行光鏡觀(guān)察，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）分泌白細(xì)胞介素-4（IL-4）、γ干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）能力，通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定脾臟組織調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）的比例，通過(guò)ELISA測(cè)定脾臟細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）含量。結(jié)果：（1）各組實(shí)驗(yàn)大鼠發(fā)病情況：正常對(duì)照組均無(wú)大鼠發(fā)��；EAE對(duì)照組大鼠全部發(fā)病，發(fā)病率為100%；LQ低、中、高劑量防治組發(fā)病率分別為80%、66.67%、60%。EAE對(duì)照組發(fā)病的潛伏期為10.27±1.67天，LQ低、中、高劑量組大鼠的發(fā)病潛伏期均有不同程度的延長(zhǎng)，分別為15.67±1.95天、17.27±1.49天、20.73±1.58天，與EAE對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），且呈劑量依賴(lài)關(guān)系。EAE對(duì)照組發(fā)病進(jìn)展期為6.47±1.19天，LQ低、中、高劑量組的發(fā)病進(jìn)展期分別為5.40±1.12天、4.20±1.15天、3.00±0.93天，較EAE對(duì)照組時(shí)間縮短（P0.01或P0.05），呈劑量依賴(lài)關(guān)系。EAE對(duì)照組發(fā)病高峰期時(shí)神經(jīng)功能障礙評(píng)分為3.73±1.39，LQ低、中、高劑量組發(fā)病高峰期時(shí)神經(jīng)功能障礙評(píng)分較EAE對(duì)照組低，分別為2.40±1.72、1.60±1.60、1.07±1.22，LQ高、中劑量組與EAE對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），LQ低劑量組發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分較EAE對(duì)照組低，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；高劑量組與低劑量組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），LQ高劑量組發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分與LQ中劑量組相比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；同時(shí)中劑量組與低劑量相比差異也不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（2）各組實(shí)驗(yàn)大鼠腦脊髓組織病理學(xué)變化：正常對(duì)照組大鼠腦脊髓組織無(wú)病理學(xué)改變；EAE對(duì)照組和LQ低、中、高劑量組大鼠腦脊髓組織都出現(xiàn)了不同程度的白質(zhì)脫髓鞘改變，大量炎性細(xì)胞聚集在腦和脊髓實(shí)質(zhì)內(nèi)的血管周?chē)�，典型者形成“袖套”樣改變，伴有血管充血。聚集�?xì)胞以淋巴細(xì)胞為主，伴少量單核細(xì)胞。LQ各劑量組的白質(zhì)脫髓鞘和炎性細(xì)胞侵潤(rùn)程度較EAE對(duì)照組減輕，且高劑量組減輕效果更明顯。（3）各組實(shí)驗(yàn)大鼠發(fā)病高峰期外周血PBMC分泌IL-4、IL-17、INF-γ能力和IL-4/INF-γ值：EAE對(duì)照組PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值較正常對(duì)照組明顯減低（P0.01），分泌IL-17、INF-γ能力較正常對(duì)照組升高（P0.01）；LQ低、中、高劑量組PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值較EAE對(duì)照組升高（P0.01），分泌IL-17、INF-γ能力較EAE對(duì)照組減低（P0.01或P0.05）；LQ高、中劑量組PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值較LQ低劑量組升高（P0.01），分泌IL-17、INF-γ能力較LQ低劑量組減低（P0.01或P0.05）；LQ高劑量組PBMC分泌IL-4能力、IL-4/INF-γ值較LQ中劑量組升高（P0.01），，分泌IL-17、INF-γ能力較LQ中劑量組減低（P0.01或P0.05）。（4）各組實(shí)驗(yàn)大鼠發(fā)病高峰期脾臟組織中Bregs的比例及培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β的含量：EAE對(duì)照組脾臟組織中的IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs比例和脾臟培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量較正常對(duì)照組減少（P0.01）；LQ低、中、高劑量組脾臟組織中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs比例和脾臟培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量較EAE對(duì)照組增高（P0.01或P0.05），LQ高、中劑量組脾臟組織中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs的比例和脾臟培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量較LQ低劑量組增高（P0.01）；LQ高劑量組脾臟組織中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs的比例和脾臟培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量較LQ中劑量組增高（P0.01）。（5）相關(guān)性分析：EAE對(duì)照組及LQ各劑量組發(fā)病潛伏期與發(fā)病高峰期IL-17呈負(fù)相關(guān)（P0.01），與IL-4、IL-4/INF-γ值、脾臟組織中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs的比例及培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量呈正相關(guān)（P0.01）；EAE對(duì)照組及LQ各劑量組發(fā)病進(jìn)展期與發(fā)病高峰期IL-17呈正相關(guān)（P0.01），與IL-4、IL-4/INF-γ值、脾臟組織中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs的比例及培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量呈負(fù)相關(guān)（P0.01）；EAE對(duì)照組及LQ各劑量組發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分與發(fā)病高峰期IL-17呈正相關(guān)（P0.01），與IL-4、IL-4/INF-γ值、脾臟組織中IL-10+Bregs、TGF-β+Bregs的比例及培養(yǎng)上清液中IL-10、TGF-β含量呈負(fù)相關(guān)（P0.01）。結(jié)論：1.采用豚鼠粗制MBP可以誘導(dǎo)Wistar大鼠建立EAE模型，EAE大鼠臨床癥狀明顯，腦組織血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)和白質(zhì)脫髓鞘明顯，說(shuō)明此方法可以成功建立EAE模型。2.EAE大鼠發(fā)病高峰期外周血PBMC分泌炎性細(xì)胞因子（IL-17、IFN-γ）增多，而分泌免疫抑制性細(xì)胞因子（IL-4）減少，導(dǎo)致Th1/Th2比例失衡，Th0分化向Th1漂移。3.Bregs對(duì)EAE大鼠有負(fù)性調(diào)節(jié)作用，其作用機(jī)制可能是Bregs通過(guò)分泌IL-10和TGF-β1等抑制性細(xì)胞因子或是通過(guò)與其他免疫細(xì)胞的相互作用來(lái)發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。4.LQ可以降低EAE大鼠發(fā)病率、延長(zhǎng)潛伏期、縮短進(jìn)展期、減輕神經(jīng)功能障礙和炎性細(xì)胞侵潤(rùn)評(píng)分，對(duì)EAE發(fā)病具有防治作用。5.LQ通過(guò)抑制EAE大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和促進(jìn)免疫抑制性細(xì)胞因子（IL-4）的產(chǎn)生，從而糾正Th1/Th2比例失衡，促使Th0分化向Th2漂移。6.LQ可以通過(guò)升高EAE大鼠脾臟Bregs的比例，從而通過(guò)Bregs及其分泌的抑制性細(xì)胞因子（IL-10、TGF-β1）而發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，從而達(dá)到對(duì)EAE的防治作用。
【關(guān)鍵詞】：拉喹莫德 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 Th細(xì)胞 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R-332;R744.51
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-25
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器18-19
• 2 EAE 模型制作及 LQ 干預(yù)19-21
• 3 取材21
• 4 臨床觀(guān)察及指標(biāo)檢測(cè)21-24
• 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24-25
• 結(jié)果25-39
• 1 各組大鼠的臨床表現(xiàn)和測(cè)定指標(biāo)變化25-29
• 2 各實(shí)驗(yàn)組大鼠腦組織和脊髓組織病理學(xué)變化29
• 3 各實(shí)驗(yàn)組大鼠發(fā)病高峰期 PBMC 分泌 IL-4、INF-γ、IL-17 的能力和 IL-4/INF-γ 的值（見(jiàn)表 5）29-33
• 4 各實(shí)驗(yàn)組大鼠發(fā)病高峰期脾臟 Bregs 分布變化（見(jiàn)表 6）33-35
• 5 各實(shí)驗(yàn)組大鼠發(fā)病高峰期脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液 IL-10、TGF-β 的濃度變化（見(jiàn)表 7）35-37
• 6 各實(shí)驗(yàn)組大鼠發(fā)病高峰期免疫學(xué)指標(biāo)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析37-39
• 討論39-55
• 1 EAE 模型的建立和評(píng)價(jià)39-40
• 2 CK 在 EAE 發(fā)病中的作用機(jī)制40-45
• 3 Bregs 在 EAE 發(fā)病中的作用45-48
• 4 LQ 在 EAE 發(fā)病中的防治作用48-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-70
• 英漢縮略詞對(duì)照表70-72
• 附圖72-74
• 致謝74-75
• 綜述75-86
• 參考文獻(xiàn)81-86

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：902171