發(fā)布時(shí)間：2017-09-22 15:01

  本文關(guān)鍵詞：脂肪干細(xì)胞復(fù)合牛心包膜修復(fù)兔腹壁缺損的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 兔脂肪干細(xì)胞 脫細(xì)胞牛心包膜 組織工程 盆腔器官脫垂 盆底重建

【摘要】：【背景和目的】 近年來，組織工程技術(shù)在女性盆底重建外科學(xué)的研究中得到了越來越多的應(yīng)用，是女性盆底重建外科學(xué)的一個(gè)重要的發(fā)展領(lǐng)域。本論文針對(duì)目前盆底重建手術(shù)面臨的一些侵蝕（erosion）、性交痛(dyspareunia)、暴露(exposure)、收縮(shrinkage)、瘺管（fistula）等術(shù)后并發(fā)癥問題，構(gòu)建一種脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）復(fù)合脫細(xì)胞牛心包膜（acellular bovine pericardium，ABP）的新型網(wǎng)片，并將其用于修復(fù)兔腹壁缺損模型，探索組織工程技術(shù)在女性盆底重建中的應(yīng)用，為女性盆底重建的研究提供新思路。 【方法】 1、兔ADSCs的分離培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記： （1）使用酶消化法、差速貼壁法取兔腹股溝區(qū)脂肪組織體外分離培養(yǎng)兔脂肪干細(xì)胞，每日在顯微鏡下觀察記錄其增殖特征及形態(tài)特點(diǎn)； （2）流式細(xì)胞儀鑒定第3代脂肪干細(xì)胞的表面標(biāo)記物并分別行成脂、成骨誘導(dǎo)分化，，證明其多向分化能力； （3）取第3代脂肪干細(xì)胞，以慢病毒介導(dǎo)的綠色熒光蛋白（pGC FU-EGFP-Lentivirus）轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后48小時(shí)倒置熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)情況； （4）取經(jīng)pGC FU-EGFP-Lentivirus標(biāo)記的第5代脂肪干細(xì)胞，利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)pGC FU-EGFP-Lentivirus的轉(zhuǎn)染率。 2、交聯(lián)ABP的制備：交聯(lián)ABP由上海欣吉特生物科技有限公司提供。行HE染色觀察其脫細(xì)胞效果及組織結(jié)構(gòu)。 3、組織工程生物活性補(bǔ)片的構(gòu)建： （1）將經(jīng)pGC FU-EGFP-Lentivirus標(biāo)記的第5代兔ADSCs接種于脫細(xì)胞牛心包膜上，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況； （2） MTT法檢測(cè)脂肪干細(xì)胞在脫細(xì)胞牛心包膜上的增殖情況。 4、兔腹壁缺損模型的建立及補(bǔ)片性能的評(píng)估： （1）于12只成年雌性新西蘭大白兔腹壁制作腹壁缺損模型，根據(jù)不同的處理方式分為以下4組：實(shí)驗(yàn)組（將復(fù)合兔ADSCs的交聯(lián)ABP植入兔腹壁缺損處）；交聯(lián)ABP植入+干細(xì)胞注射組（將交聯(lián)ABP植入兔腹壁缺損處后ABP下注射干細(xì)胞）；交聯(lián)ABP植入組（單純交聯(lián)ABP植入）；空白對(duì)照組（腹壁缺損處不作任何處理）； （2）分別于移植后第1、2、3月取出移植物行組織學(xué)觀察評(píng)價(jià)宿主的炎癥反應(yīng)及兔ADSCs復(fù)合交聯(lián)ABP的生物相容性；行熒光顯微鏡觀察兔腹壁缺損處綠色熒光蛋白的表達(dá)情況；行拉力試驗(yàn)研究生物活性補(bǔ)片植入后的生物力學(xué)性能。 【結(jié)果】 1、傳代培養(yǎng)的兔ADSCs形態(tài)較為均勻，呈旋渦狀、輻射狀排列，體外增殖穩(wěn)定快速。流式細(xì)胞儀檢測(cè)示CD29、CD90、CD105表達(dá)陽性， CD34表達(dá)陰性，油紅O及茜素紅染色均為陽性。 2、HE染色顯示牛心包膜的細(xì)胞基本脫去，呈由染成紅色的膠原纖維組成網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)。 3、pGC FU-EGFP-Lentiviru轉(zhuǎn)染兔ADSCs48小時(shí)后，熒光顯微鏡可觀察到EGFP高表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)示pGC FU-EGFP-Lentivirus的轉(zhuǎn)染率達(dá)78%左右。此外，熒光顯微鏡觀察示ADSCs在ABP上黏附生長(zhǎng)良好，MTT示細(xì)胞增殖能力與未接種于脫細(xì)胞牛心包膜的ADSCs無明顯區(qū)別。 4、所有動(dòng)物均未發(fā)生補(bǔ)片侵蝕。實(shí)驗(yàn)組和交聯(lián)ABP+干細(xì)胞注射組移植后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的移植物皺縮及粘連均顯著小于單純交聯(lián)ABP植入組。熒光顯微鏡觀察示植入后的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和交聯(lián)ABP+干細(xì)胞注射組均可觀察到EGFP表達(dá)，EGFP的表達(dá)量未見明顯差別，且隨著時(shí)間的推移EGFP的表達(dá)量均未見明顯減弱。組織學(xué)觀察示實(shí)驗(yàn)組和交聯(lián)ABP+干細(xì)胞注射組的生物相容性均優(yōu)于單純交聯(lián)ABP植入組，而實(shí)驗(yàn)組與交聯(lián)ABP+干細(xì)胞注射組之間無明顯差別。 5、拉力試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)植入后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)含有交聯(lián)ABP的各個(gè)組的斷裂拉伸應(yīng)力參數(shù)均高于空白組，而實(shí)驗(yàn)組及交聯(lián)ABP+干細(xì)胞注射組的斷裂拉伸應(yīng)力參數(shù)則高于單純交聯(lián)ABP植入組。隨植入時(shí)間的延長(zhǎng)，各個(gè)組的斷裂拉伸應(yīng)力參數(shù)均逐漸增高。 【結(jié)論】兔ADSCs是一種理想的組織工程種子細(xì)胞，其與交聯(lián)ABP體內(nèi)、體外復(fù)合所構(gòu)建的組織工程活性補(bǔ)片均有助于腹壁組織缺損的修復(fù)，可進(jìn)一步應(yīng)用于女性盆底重建。
【關(guān)鍵詞】：兔脂肪干細(xì)胞 脫細(xì)胞牛心包膜 組織工程 盆腔器官脫垂 盆底重建
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫11-12
• 引言12-15
• 第一部分 ADSCs 的分離培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記15-25
• 材料和方法15-19
• 結(jié)果19-22
• 討論22-24
• 結(jié)論24-25
• 第二部分 組織工程生物活性補(bǔ)片的體外構(gòu)建及修復(fù)兔腹壁缺損的實(shí)驗(yàn)25-41
• 材料和方法26-30
• 結(jié)果30-38
• 討論38-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 綜述46-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表及待發(fā)表的論文56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間參與的課題57-58
• 致謝58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 劉春曉;林陽彥;李虎林;鄭少波;;絲素蛋白膜修復(fù)兔尿道缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年02期

2 胡孝輝;楊鵬高;高豐厚;方勇;;去細(xì)胞羊膜負(fù)載毛囊干細(xì)胞修復(fù)裸鼠全層皮膚缺損[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年12期

3 朱衛(wèi)東;徐月敏;馮超;崔磊;;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白標(biāo)記兔脂肪干細(xì)胞體外復(fù)合膀胱黏膜下層的生長(zhǎng)特性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年41期

本文編號(hào)：901470