本文關(guān)鍵詞：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性和分子分型研究

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【摘要】：【研究背景】 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)是一種革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,屬于耶爾森菌屬,是該菌屬的三大致病菌之一。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌廣泛存在于自然環(huán)境中,主要通過(guò)污染食物進(jìn)入人體。人感染小腸結(jié)腸炎耶爾森菌后,主要表現(xiàn)為胃腸道癥狀,如嘔吐、腹痛、腹瀉等,多具有自限性。但是,部分患者可出現(xiàn)一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥,如心內(nèi)膜炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、組織膿腫等,甚至引起敗血癥導(dǎo)致死亡。在歐洲,由該菌和假結(jié)核耶爾森菌引起的耶氏菌病在常見(jiàn)的人畜共患病中占第四位；在美國(guó),由該菌引起的疾病每年發(fā)病約11.7萬(wàn)例；在我國(guó),文獻(xiàn)可查的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌暴發(fā)有兩次。該菌可分為6個(gè)生物型(1A,1B和2～5)和60個(gè)血清型,主要通過(guò)檢測(cè)ail、ystA、ystB、yadA和virF5個(gè)毒力基因來(lái)判斷其致病性。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌對(duì)青霉素和一代頭孢天然耐藥,對(duì)其他種類的抗菌藥物具有不同程度的耐藥率。脈沖場(chǎng)凝膠電泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型是現(xiàn)階段小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分子分型最常用的方法,主要用于菌株的溯源。 山東省自2006年開(kāi)始,設(shè)立高密市和五蓮縣兩個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)對(duì)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌開(kāi)展監(jiān)測(cè),至2011年共從雞、牛、羊、豬等動(dòng)物糞便和生熟肉、蒼蠅中分離到小腸結(jié)腸炎耶爾森菌237株。這些菌株的動(dòng)力、生物型、血清型、毒力基因和抗菌藥物敏感性等生物學(xué)特性尚缺乏系統(tǒng)性的研究分析,分子分型也尚未開(kāi)展。 【研究目的】 1、系統(tǒng)分析分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的動(dòng)力、生物型、血清型、毒力基因和抗菌藥物敏感性等生物學(xué)特性及其時(shí)間、地區(qū)和宿主分布特點(diǎn)。 2、對(duì)分離到的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌進(jìn)行PFGE分型,了解菌株的親緣關(guān)系,探討表型分型和PFGE分型的相互關(guān)系。 3、初步建立山東省小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù),為該菌的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)奠定基礎(chǔ),為耶氏菌病的預(yù)測(cè)、預(yù)警提供技術(shù)支持。 【研究方法】 1、動(dòng)力試驗(yàn)采用半固體穿刺法,生物分型根據(jù)生化反應(yīng)進(jìn)行判斷,血清分型采用玻片凝集法,毒力基因檢測(cè)采用PCR法,抗菌藥物敏感性檢測(cè)采用VITEK2COMPACT系統(tǒng)和AST-GN16藥敏卡。 2、PFGE分型參照PulseNet China推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行,電泳圖譜處理及聚類分析采用BioNumerics6.1軟件。 3、資料的錄入、整理和簡(jiǎn)單分析采用Excel2007軟件,數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS16.0軟件。 【研究結(jié)果】 1、動(dòng)力為“中”的菌株占4.2%(10/237),動(dòng)力為“差”的菌株占3.0%(7/237),其余菌株動(dòng)力良好。動(dòng)力為“中”或“差”的菌株在各年份、各地區(qū)和多種宿主中均有分布。 2、98.7%(234/237)的菌株為生物1A型；其余3株菌為生物4型,均從2006年高密市的豬糞樣本中分離到。 3、49.8%(118/237)的菌株凝出相應(yīng)血清型,以0：5(21.9%,52/237)和O：8(21.1%,50/237)型為主。2011年可分血清型最多(5種)；高密分離株0：5型最多(23.9%,39/163),五蓮分離株0：8型最多(33.8%,25/74)；各宿主分離株均以O(shè)：5和O：8型為主。 4、ystB基因的陽(yáng)性率最高,為81.4%(193/237)；ail和ystA基因僅在3株菌中檢測(cè)到,陽(yáng)性率為1.3%(3/237)；未檢測(cè)到y(tǒng)adA和virF基因。ystB基因陽(yáng)性菌株在不同時(shí)間、地區(qū)和宿主中均為優(yōu)勢(shì)菌株。 5、共有235株菌獲得抗菌藥物敏感性試驗(yàn)的結(jié)果。菌株對(duì)頭孢曲松、頭孢吡肟、阿米卡星、慶大霉素和替加環(huán)素的敏感率最高,為100%；對(duì)氨芐西林的耐藥率最高,為94.5%(222/235)。菌株的多重耐藥率為12.3%(29/235)。2007和2011年分離株對(duì)呋喃妥因的敏感情況有差異(P0.05)；高密市分離株對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥率(10.4%,17/163)高于五蓮縣分離株(1.4%,1/72)(P0.05)；毒力基因A型(ail-ystA-ystB+yadA-virF-)菌株對(duì)氨芐西林、阿莫西林-克拉維酸、頭孢唑林、頭孢西丁的耐藥率和對(duì)呋喃妥因的中介耐藥率(依次為99.0%,190/192；89.6%,172/192；94.8%,182/192；80.2%,154/192；94.8%,182/192)高于毒力基因B型(ail-ystA-ystB-yadA-virF-)菌株(依次為72.5%,29/40；65.0%,26/40；67.5%,27/40；42.5%,17/40；65.0%,26/40)(P0.05)。 6、237株菌中的231株被分為144個(gè)PFGE型別,相似性系數(shù)在61.1%～100.0%,無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)型別。五蓮分離株的PFGE聚集性高于高密分離株,含7株及以上菌株的PFGE型別均出現(xiàn)在五蓮縣。其余6株菌未獲得PFGE條帶。144個(gè)PFGE型別中有15個(gè)型別在中國(guó)疾控中心數(shù)據(jù)庫(kù)中可找到相同或相近的型別。 7、17株動(dòng)力為“中”或“差”的菌株中的14株形成3個(gè)聚類簇；52株0：5血清型菌株中的31株形成4個(gè)聚類簇,50株0：8血清型菌株中的19株形成1個(gè)聚類簇；41株毒力基因B型(ail-ystA-ystB-yadA-virF-)菌株中的20株形成1個(gè)聚類簇；藥敏型別在PFGE聚類中分布分散,無(wú)特異性。 8、動(dòng)力、生物分型、血清分型、毒力基因分型、藥敏分型和PFGE分型的Simpson指數(shù)分別為0.1362、0.0251、0.6564、0.3081、0.7214和0.9982。 [結(jié)論] 1、高密市和五蓮縣的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌存在動(dòng)力突變株；菌株幾乎全為生物1A型；血清型以0：5和0：8型為主,存在地區(qū)差異；菌株攜帶的毒力基因主要為ystB基因,無(wú)傳統(tǒng)致病性菌株；耐藥譜廣泛,大部分菌株對(duì)青霉素類和一、二代頭孢耐藥,存在一定的多重耐藥現(xiàn)象,vstB基因陽(yáng)性的生物1A型菌株與ystB基因陰性的生物1A型菌株耐藥性不同。 2、高密市和五蓮縣的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌存在多克隆系,基因多態(tài)性明顯,部分克隆株長(zhǎng)期存在,五蓮地區(qū)可能存在相對(duì)優(yōu)勢(shì)克隆系；部分山東分離株可能與其他省份菌株存在聯(lián)系。 3、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的PFGE分型可能與其動(dòng)力有一定相關(guān),與生物型、血清型、毒力基因型和藥敏型別不具有相關(guān)性。 4.PFGE具有強(qiáng)大的分型能力,但在菌株溯源時(shí)需與表型分型聯(lián)合使用。
【關(guān)鍵詞】：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 動(dòng)力 毒力基因 抗菌藥物敏感性 脈沖場(chǎng)凝膠電泳
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R378.2
【目錄】：

• 目錄4-6
• CONTENTS6-8
• 中文摘要8-12
• Abstract12-16
• 符號(hào)說(shuō)明16-18
• 前言18-26
• 1 概述18-24
• 1.1 病原學(xué)18-19
• 1.2 流行病學(xué)19-21
• 1.3 毒力基因21-22
• 1.4 抗菌藥物敏感性22
• 1.5 分子分型22-24
• 2 研究的目的和意義24
• 3 技術(shù)路線圖24-26
• 材料與方法26-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 1.1 研究對(duì)象26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑26-27
• 1.3 主要儀器27-28
• 1.4 所用軟件28
• 2 方法28-35
• 2.1 動(dòng)力試驗(yàn)28
• 2.2 生物分型28-29
• 2.3 血清分型29
• 2.4 毒力基因檢測(cè)29-30
• 2.5 抗菌藥物敏感性檢測(cè)30
• 2.6 PFGE分型30-34
• 2.7 數(shù)據(jù)處理與分析34-35
• 3 質(zhì)量控制35-37
• 3.1 設(shè)計(jì)階段35-36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)實(shí)施階段36
• 3.3 資料分析階段36-37
• 結(jié)果37-59
• 1 動(dòng)力試驗(yàn)37
• 2 生物分型37
• 3 血清分型37-39
• 3.1 不同年份菌株的血清型分布38
• 3.2 不同地區(qū)菌株的血清型分布38
• 3.3 不同宿主菌株的血清型分布38-39
• 4 毒力基因檢測(cè)39-41
• 4.1 不同年份菌株的毒力基因型別分布40
• 4.2 不同地區(qū)菌株的毒力基因型別分布40
• 4.3 不同宿主菌株的毒力基因型別分布40-41
• 5 抗菌藥物敏感性檢測(cè)41-50
• 5.1 總體情況41-42
• 5.2 不同年份菌株的抗菌藥物敏感情況42-46
• 5.3 不同地區(qū)菌株的抗菌藥物敏感情況46
• 5.4 不同宿主菌株的抗菌藥物敏感情況46-48
• 5.5 不同生物學(xué)特性菌株的抗菌藥物敏感情況48-50
• 6 PFGE分型50-56
• 6.1 總體情況50-52
• 6.2 不同年份菌株的PFGE分型情況52
• 6.3 不同地區(qū)菌株的PFGE分型情況52
• 6.4 不同宿主菌株的PFGE分型情況52-53
• 6.5 菌株溯源53-56
• 7 表型分型與PFGE分型間的關(guān)聯(lián)56-58
• 8 不同分型方法的分辨能力58-59
• 討論59-69
• 1 動(dòng)力試驗(yàn)59
• 2 生物分型59
• 3 血清分型59-61
• 4 毒力基因檢測(cè)61
• 5 抗菌藥物敏感性61-64
• 6 PFGE分型64-66
• 7 表型分型與PFGE分型間的關(guān)聯(lián)66-68
• 8 不同分型方法的分辨能力68-69
• 結(jié)論69-70
• 創(chuàng)新與不足70-71
• 1 創(chuàng)新70
• 2 不足70-71
• 附錄71-80
• 附錄一 實(shí)驗(yàn)中溶液的配置方法71-73
• 附錄二 附表附圖73-80
• 參考文獻(xiàn)80-89
• 致謝89-91
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文91-92
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表92

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：895085