發(fā)布時間：2017-09-19 17:06

  本文關(guān)鍵詞：中國單增李斯特菌家系Ⅱ菌株毒力相關(guān)表型及生物膜形成相關(guān)基因差異研究

  更多相關(guān)文章： 單增李斯特菌 遺傳家系Ⅱ 生物膜形成 主成分分析

【摘要】：單增李斯特菌廣泛分布于環(huán)境中,是典型的胞內(nèi)寄生菌,通過污染食品引起人類李斯特菌病,因其在食品及環(huán)境中具有較高的污染率及病人的高致死率而引起關(guān)注。目前我國尚無單增李斯特菌引起人群感染暴發(fā)的報道,在所分離到的單增李斯特菌株中,遺傳家系Ⅱ菌株占有非常高的比例,其中尤以ST9(29%)、ST8(11%)作為優(yōu)勢ST型別。本研究利用國際上通用的Structure 2.3模型聚類軟件對巴斯德研究所MLST數(shù)據(jù)庫中現(xiàn)有單增李斯特菌ST型別根據(jù)SNP位點數(shù)目多次聚類分組分析,并結(jié)合本科室收集的我國ST菌株權(quán)重,選取了25株家系Ⅱ代表菌株,通過測定生長曲線、體外細胞侵襲、溶血活性、生物膜形成量和抵抗阿米巴吞噬等表型實驗方法,對家系Ⅱ菌株毒力及環(huán)境適應(yīng)相關(guān)表型進行了描述和比較,以探索我國單增李斯特菌在食品與環(huán)境中的存在能力差異原因及致病性差異特征。實驗結(jié)果表明,不同的家系Ⅱ菌株在體外侵襲能力、溶血活性、生物膜形成能力和抵抗阿米巴吞噬能力方面均存在差異。其中侵襲能力和生物膜形成能力作為主成分分析(PCA)中對兩個主成分各自貢獻最大的兩個表型實驗因素,可將所研究的家系Ⅱ菌株進行聚類并分為三組,第一組菌株具有強生物膜形成能力而侵襲力較低,可能長期存留在環(huán)境中但毒力卻較低,其存在潛在致病能力；第二組菌株生物膜形成能力和侵襲力均比較低,說明其環(huán)境適應(yīng)能力與毒力均比較弱,致病能力相對比較有限；第三組侵襲能力較高而生物膜形成能力變異較大,提示其具有較強的致病能力,而在環(huán)境中長期生存能力不確定,對人類潛在威脅最大。PCA分組結(jié)果提示單增李斯特菌的環(huán)境生存能力和致病能力可能存在一定聯(lián)系。本研究對遺傳家系Ⅱ單增李斯特菌毒力表型及環(huán)境相關(guān)表型特征結(jié)果進行了分析,提示家系Ⅱ菌株存在引起我國人群感染暴發(fā)流行的潛在危害性,應(yīng)當引起我國食品安全及疾病預(yù)防控制相關(guān)部門的重視。同時本研究初步建立了LM環(huán)境相關(guān)表型實驗技術(shù)體系,為今后更深入探索LM環(huán)境適應(yīng)機制及進化研究提供了基礎(chǔ)。單增李斯特菌生物膜形成能力是影響其環(huán)境中適應(yīng)和存活能力的主要因素。LM通過在食品加工材料內(nèi)表面粘附并分泌大量胞外聚合物而形成生物膜,可以在不利的環(huán)境條件下長期存留于食品及其相關(guān)環(huán)境中,從而對公共衛(wèi)生產(chǎn)生長期威脅。LM生物膜形成機制復(fù)雜,其生物膜結(jié)構(gòu)形成受許多因素的影響。目前國際上關(guān)于胞外基質(zhì)(表面多糖、胞外DNA、蛋白質(zhì)、聚谷氨酸、磷壁酸等)對生物膜形成的影響尚不明確,普遍認為其主要起到維持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定及保護生物膜的作用。大多數(shù)研究認為,起始粘附階段和生物膜成熟形成階段的生物膜形成量均受到特定的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和表達的控制。在25株家系Ⅱ菌株生物膜形成量測定結(jié)果基礎(chǔ)上,對其中5株生物膜形成能力有明顯差異的LM進行了生物膜形成不同階段相關(guān)基因的研究。結(jié)果顯示,大部分生物膜形成相關(guān)基因未發(fā)生突變或重組,或存在部分同義突變,僅有hpt、luxS、prfA、sigB在部分菌株中存在氨基酸改變,但這些基因改變與生物膜形成能力之間沒有一致性。通過鞭毛蛋白編碼相關(guān)基因flaA檢測比對及動力試驗比較結(jié)果發(fā)現(xiàn),菌株的運動能力可能與生物膜形成能力存在一定聯(lián)系。生物膜相關(guān)蛋白樣基因bapL的表達與生物膜形成能力間的相關(guān)性尚不明確,其功能有待進一步研究證實。
【關(guān)鍵詞】：單增李斯特菌 遺傳家系Ⅱ 生物膜形成 主成分分析
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378
【目錄】：

• 縮略詞5-6
• 論文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 第一部分 中國單增李斯特菌家系Ⅱ菌株毒力相關(guān)表型研究13-33
• 材料與方法14-20
• 一. 實驗材料14-16
• 二. 實驗方法16-20
• 實驗結(jié)果20-29
• 1. 生長曲線測定20
• 2. 細胞侵襲實驗結(jié)果20-22
• 3. 溶血活性試驗22-23
• 4. 生物膜形成實驗23-25
• 5. 抵抗阿米巴吞噬實驗25-26
• 6. 表型屬性主成分分析26-29
• 討論29-33
• 第二部分 單增李斯特菌家系Ⅱ菌株生物膜相關(guān)基因差異研究33-43
• 材料與方法34-37
• 一. 實驗材料34
• 二. 實驗方法34-37
• 實驗結(jié)果37-41
• 1. 生物膜形成相關(guān)基因檢測結(jié)果37-39
• 2. 動力實驗結(jié)果39-41
• 討論41-43
• 參考文獻43-47
• 綜述 單增李斯特菌生物膜形成研究進展47-57
• 參考文獻53-57
• 發(fā)表文章57-64
• 致謝64

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