本文關(guān)鍵詞：磁珠為載體構(gòu)建檢測大腸桿菌O157:H7生物傳感器

  更多相關(guān)文章： 大腸桿菌O157:H7 磁珠 漆酶 化學發(fā)光免疫分析

【摘要】：大腸桿菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)是產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(Shiga-producing Escherichia coli, STEC)的主要血清型,是目前公認的引起食源性疾病的重要致病菌。因此,建立快速、靈敏度高的檢測方法具有重要意義。本文主要包括以下的工作：基于漆酶化學發(fā)光體系檢測大腸桿菌O157:H7的免疫分析以包被有兔抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體的磁珠為載體。首先,包被有兔抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體的免疫磁珠與目標菌進行免疫反應(yīng)。再加入生物素化鼠抗大腸桿菌O157:H7單克隆抗體,進行免疫孵育,形成雙抗夾心結(jié)構(gòu)。最后加入親和素化葡萄糖氧化酶,從而形成一個酶催化放大系統(tǒng)檢測大腸桿菌O157:H7。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖產(chǎn)生過氧化氫,磁性分離,將過氧化氫加入到漆酶催化化學發(fā)光體系中�；瘜W發(fā)光信號的大小與待分析物大腸桿菌O157:H7的濃度成正比。檢測限可達到2.7×103 CFU mL-1,線性范圍為4.3×103 CFU mL-1至1.7×105 CFU mL-1。該方法能夠快速、低成本、易操作和較高靈敏度檢測大腸桿菌O157:H7。
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌O157:H7 磁珠 漆酶 化學發(fā)光免疫分析
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R378.21;TP212.3
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-8
• 1 文獻綜述8-25
• 1.1 大腸桿菌O157:H7簡介8-16
• 1.1.1 大腸桿菌O157:H7發(fā)病及流行情況8-9
• 1.1.2 大腸桿菌O157:H7的生物學特性及發(fā)病機制9
• 1.1.3 大腸桿菌O157:H7感染的流行病學9-10
• 1.1.4 國內(nèi)外檢測大腸桿菌O157:H7的概況10-16
• 1.2 磁珠的功能及其應(yīng)用16-21
• 1.2.1 磁珠的特性16-17
• 1.2.2 磁珠在生物學中的應(yīng)用17-21
• 1.3 基于漆酶化學發(fā)光體系21-24
• 1.4 目的和意義24-25
• 2 材料與方法25-31
• 2.1 主要儀器25
• 2.2 主要試劑及主要溶液的配制25-27
• 2.3 免疫傳感器的構(gòu)建27-28
• 2.4 細菌的培養(yǎng)與計數(shù)28
• 2.5 生物素化抗體的制備28-29
• 2.6 免疫磁珠的制備及磁珠標記抗體標記率計算29-30
• 2.7 免疫過程30
• 2.8 化學發(fā)光檢測30-31
• 3 結(jié)果與討論31-48
• 3.1 生物素化鼠抗大腸桿菌O157:H7單克隆抗體的制備31-32
• 3.2 磁性微粒固定兔抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體的量32-33
• 3.3 實驗條件的優(yōu)化33-41
• 3.3.1 反應(yīng)最適pH的優(yōu)化33-35
• 3.3.2 魯米諾濃度的優(yōu)化35-36
• 3.3.3 漆酶濃度的優(yōu)化36-37
• 3.3.4 磁珠用量的優(yōu)化37-38
• 3.3.5 生物素化抗體濃度的優(yōu)化38-39
• 3.3.6 親和素化葡萄糖氧化酶濃度的優(yōu)化39-40
• 3.3.7 底物葡萄糖濃度的優(yōu)化40-41
• 3.4 工作曲線、檢測限、重現(xiàn)性41-43
• 3.5 特異性43-45
• 3.6 實際樣品中的檢測45-47
• 3.7 討論47-48
• 參考文獻48-56
• 致謝56

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本文編號：875203