本文關(guān)鍵詞：抗IL-4全人源單鏈抗體的篩選和鑒定

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【摘要】：目的表達(dá)人白細(xì)胞介素4(IL-4),從全人源單鏈抗體(sc Fv)文庫(kù)中篩選抗IL-4全人源sc Fv并鑒定其特異性。方法采用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)p ET102/IL-4/BL21表達(dá)IL-4,進(jìn)行純化鑒定。利用全人源噬菌體抗體文庫(kù)表達(dá)抗IL-4全人源sc Fv,用表達(dá)的IL-4作為抗原,篩選陽(yáng)性克隆菌株經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定。采用斑點(diǎn)雜交檢測(cè)抗IL-4sc Fv的特異性。結(jié)果表達(dá)的IL-4融合蛋白相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為27 000。采用該抗原篩選出了表達(dá)抗IL-4的陽(yáng)性克隆,PCR結(jié)果顯示,在約1000 bp處有擴(kuò)增的目的條帶。酶切結(jié)果顯示,有2株克隆的指紋圖譜相同,其余均不同。選取指紋圖譜不同的且與IL-4結(jié)合能力強(qiáng)的4個(gè)sc Fv的克隆進(jìn)行測(cè)序,顯示有3個(gè)的序列正確。斑點(diǎn)雜交顯示,這3株克隆表達(dá)的sc Fv均具有特異性。結(jié)論成功篩選到抗IL-4全人源sc Fv。
【作者單位】： 四川醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)教研室;四川醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 白細(xì)胞介素(IL-) 全人源單鏈抗體 篩選 鑒定
【基金】：四川省青年基金(2012JQ0018) 四川省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(130259) 瀘州市科技局項(xiàng)目(2012-177)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 白細(xì)胞介素4(interleukin 4,IL-4)、IL-13是由2型輔助性T(T helper 2,Th2)細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,與2型炎癥反應(yīng)有關(guān),在多種疾病如哮喘、過(guò)敏性皮炎、過(guò)敏性鼻炎、慢性阻塞性肺疾病等的發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮重要作用[1-6]。研究顯示[7-12,4],IL-4、IL-13

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本文編號(hào)：871008