本文關(guān)鍵詞：前列腺素E1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導人正常肝細胞株L02細胞凋亡中的作用及相關(guān)機制的探討

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【摘要】：目的：近幾年的研究結(jié)果表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)是多種肝臟疾病中的常見病理現(xiàn)象,脂肪酸、酒精、病毒、藥物等因素可誘導肝細胞ER stress,強烈而持久的ER stress誘導肝細胞凋亡。既往研究證實前列腺素E1(prostaglandin E1, PGE1)具有保護肝細胞凋亡、促進肝細胞增殖等作用,但對其在ER stress誘導的肝細胞凋亡中的作用尚不清楚。本研究的目的是探討PGE1對ERstress誘導正常人肝細胞L02細胞凋亡中的作用及相關(guān)機制。 方法：1、以正常人肝細胞株L02細胞為研究對象,采用不同濃度毒胡蘿卜素(thapsigargin, TG)誘導L02細胞ER stress及細胞凋亡,通過流式細胞儀檢測不同時間點L02細胞的凋亡率；2、用1μM TG誘導L02細胞ER stress及細胞凋亡,同時加用0.5gM及1μM濃度PGE1,觀察不同時間點PGE1對TG誘導L02細胞凋亡的保護作用,用4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid, PBA)作陽性對照；3、用1μMTG誘導ER stress,通過蛋白免疫印跡方法(western blotting, WB)檢測葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein78, GRP78)、剪切型X盒結(jié)合蛋白1(spliced X-box binding protein1, sXBP-1)、CHOP (C/EBP-homologous protein)的表達判斷ER stress;4、用WB法檢測PGE1對TG誘導的L02細胞GRP78、sXBP-1、CHOP蛋白表達的調(diào)節(jié)作用；5、用1μM PGE1作用于L02細胞,用WB法檢測不同時間點肝細胞內(nèi)GRP78的表達。 結(jié)果：1、1μM TG作用于L02細胞6h后凋亡率顯著升高,至48h凋亡率達到32.66%,各時間點與空白對照(NC)比較差異均有顯著性意義(P0.01)。1μM、2μM及3μMTG在48h劑量依賴性增加L02細胞凋亡率,相差有顯著性意義(P0.01)；2、0.5μM及1μMPGE1、5mM及10mM PBA在48h呈劑量依賴性降低TG誘導L02細胞的凋亡率(P0.01),1μMPGE1及10mMPBA在6h、24h及48h均顯著降低TG誘導的L02細胞凋亡率(P0.01)；3.1μMTG作用于L02細胞后,GRP78、sXBP1、CHOP的表達顯著增加,PGEl在作用6h后明顯增加TG誘導的GRP78、sXBP1、CHOP的表達,隨著時間的延長GRP78、sXBP1、CHOP的表達逐漸減弱,48h后3種蛋白的表達弱于TG組；4、PGE1顯著誘導L02細胞GRP78表達,6h達到高峰。 結(jié)論：我們的研究證實PGE1顯著減少ER stress誘導的L02細胞凋亡。PGE1減少TG誘導的L02細胞凋亡的機制可能與其早期上調(diào)GRP78蛋白的表達,后期下調(diào)GRP78蛋白的表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：L02細胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激 GRP78 sXBP1 凋亡
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 英文縮略詞表3-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-44
• 討論44-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-56
• 病例報告：肝硬化并發(fā)乳糜胸水一例報告并文獻復習56-61
• 1. 病例報告56-57
• 2. 文獻復習57-58
• 3. 討論58-59
• 參考文獻59-61
• 綜述：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導自噬的分子機制及意義61-73
• 參考文獻67-73
• 課題選題來源73-74
• 致謝74-75
• 自我介紹75

【參考文獻】

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本文編號：868244