本文關(guān)鍵詞：制備轉(zhuǎn)基因模型小鼠的基礎(chǔ):人白細(xì)胞抗原A0206基因慢病毒載體構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：背景:有研究表明人白細(xì)胞抗原-A*0206亞型與鼻咽癌的發(fā)生正相關(guān),但目前還沒(méi)有相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型,以用于從整體水平評(píng)價(jià)HLA-A*0206與鼻咽癌的關(guān)系及進(jìn)一步研究免疫和基因療法。目的:構(gòu)建pL VX-CMV-人白細(xì)胞抗原-A*0206-HA-mC MV-Zs Green載體,并進(jìn)行病毒包裝,以用于HLA-A*0206轉(zhuǎn)基因小鼠制作。方法:合成HLA-A*0206序列,利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在5’端引入Eco RⅠ酶切位點(diǎn),在3’端引入Bam HⅠ酶切位點(diǎn)和流感病毒血凝素標(biāo)簽,Eco RⅠ和Bam HⅠ雙酶切目的片段及p LVX-CMV-m CMV-Zs Green質(zhì)粒,連接酶切產(chǎn)物,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞,雙酶切及測(cè)序鑒定陽(yáng)性重組質(zhì)粒,陽(yáng)性重組質(zhì)粒與四質(zhì)粒包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染表達(dá)SV40大T抗原的人腎上皮細(xì)胞系293T細(xì)胞,產(chǎn)生含目的基因的慢病毒。結(jié)果與結(jié)論:凝膠電泳及測(cè)序證實(shí)人白細(xì)胞抗原A*0206基因成功導(dǎo)入pL VX-CMV-mC MV-ZsG reen骨架質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48 h后的轉(zhuǎn)染率為92%。熒光法測(cè)定病毒滴度,獲得病毒滴度約為5×108。結(jié)果證實(shí),實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了含巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、HLA-A*0206、流感病毒血凝素標(biāo)簽以及ZsG reen報(bào)告基因的慢病毒。
【作者單位】： 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒屬 鼻咽腫瘤 轉(zhuǎn)基因小鼠 綠色熒光蛋白質(zhì)類 組織構(gòu)建 組織工程 鼻咽癌 慢病毒 人白細(xì)胞抗原 綠色熒光蛋白 四質(zhì)粒包裝系統(tǒng) 流感病毒血凝素 巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子 質(zhì)粒
【基金】：廣東省科學(xué)技術(shù)廳科技基礎(chǔ)條件建設(shè)項(xiàng)目(2011B060300020)~~
【分類號(hào)】：R-332;R739.63
【正文快照】： 0引言Introduction人白細(xì)胞抗原A*0206基因慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及儀器:中國(guó)華南地區(qū)是鼻咽癌高發(fā)病區(qū)[1-2]。影響鼻咽癌發(fā)病試劑及儀器來(lái)源率的因素包括遺傳因素[3-4]、EB病毒感染和環(huán)境因素[5-8]。HLA-A*0206 InvitrogenSimons等[9]首先通過(guò)研究華裔新加坡人,

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 何迎春;盧芳國(guó);田道法;劉紅萍;;TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)基因表達(dá)的關(guān)系[J];癌變.畸變.突變;2008年05期

2 潘秀芳,劉斌,郭長(zhǎng)占,田楓,王兆綽;用顯微注射法制備攜帶Epstein-Barr病毒膜抗原基因——BLLF1的轉(zhuǎn)基因小鼠[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年05期

3 柯霞;洪蘇玲;;鼻咽癌動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年11期

4 藍(lán)軻,喬貴林,沈新民,張玲,呂麗春,姚開(kāi)泰;鼻咽癌來(lái)源潛伏膜蛋白1的表達(dá)誘發(fā)轉(zhuǎn)基因小鼠鼻咽不典型增生[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2002年05期

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6 何迎春;劉宇勤;廖端芳;戴娜;何蘭;范婧瑩;田道法;;不同中醫(yī)臨床證型下行型鼻咽癌組織細(xì)胞核蛋白質(zhì)差異表達(dá)的初步研究[J];癌變·畸變·突變;2013年03期

7 陳祁青;金紅婷;應(yīng)俊;王萍兒;吳承亮;童培建;肖魯偉;;右歸飲含藥血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的促進(jìn)作用及其microRNA表達(dá)譜分析[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年05期

8 何迎春;田道法;劉剛;盧芳國(guó);范婧瑩;吳新正;羅齊平;;益氣解毒方對(duì)TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年05期

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10 何迎春;田道法;劉紅萍;盧芳國(guó);吳新正;;TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮組織生物學(xué)表型特征及細(xì)胞周期特點(diǎn)分析[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2008年09期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 吳新正;TgN（p53mt-LMP1）/HT轉(zhuǎn)基因小鼠鼻咽黏膜上皮細(xì)胞生物學(xué)表型特征與p53信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)性及益氣解毒方干預(yù)研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 王化修;TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽上皮細(xì)胞間隙連接與鼻咽上皮細(xì)胞癌變的相關(guān)性及益氣解毒方的干預(yù)效應(yīng)[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 呂麗春;EBV易感轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型的建立[D];中國(guó)人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 楊玉芳;用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 李萍;鼻咽癌雞胚絨毛尿囊膜移植瘤模型的建立及其在腫瘤生物學(xué)行為研究上的應(yīng)用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

6 柯霞;靶向脫氧核酶抑制鼻咽癌EBV-LMP1基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

7 張征崢;microRNA-155調(diào)節(jié)小鼠乳腺癌細(xì)胞株4T1生物學(xué)行為及相關(guān)機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

8 張曄;慢病毒介導(dǎo)PTL基因干預(yù)的星形膠質(zhì)細(xì)胞在帕金森病模型中的保護(hù)作用研究[D];蘇州大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 李欣;EB病毒早期基因BHRF1轉(zhuǎn)基因模型鼠的建立[D];青島大學(xué);2009年

2 賀安意;轉(zhuǎn)LMP1-mtP53基因小鼠癌前病變的器官靶向性及益氣解毒方的干預(yù)效應(yīng)研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2007年

3 文川;高表達(dá)HPPCn轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定及評(píng)價(jià)HPPCn在肝癌發(fā)生過(guò)程中的作用[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

4 周計(jì)丹;豬O3FAR1基因啟動(dòng)子的克隆及轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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1 藍(lán)軻,任彩萍,謝鷺,何志巍,甘潤(rùn)良,姚開(kāi)泰;兩種不同來(lái)源LMP1致瘤性的比較研究[J];癌癥;2001年10期

2 楊玉芳,丁彥青,石益民,劉換新;嗜上皮細(xì)胞特異性啟動(dòng)子ED-L2轉(zhuǎn)基因小鼠的建立[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年21期

3 姚開(kāi)泰;從死因回顧調(diào)查資料看湖南省鼻咽癌流行病學(xué)的一些特點(diǎn)并探索其發(fā)病機(jī)理[J];湖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1982年01期

4 張玲,藍(lán)軻,馮湘玲,喬貴林,沈新民,石益民,李虹,姚開(kāi)泰;用鼻咽相對(duì)特異性調(diào)控區(qū)建立N-LMP1轉(zhuǎn)基因小鼠[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2003年12期

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張榮;;可溶性人白細(xì)胞抗原-Ⅰ臨床研究現(xiàn)狀[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;2006年02期

2 英華;;人白細(xì)胞抗原[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);1981年06期

3 孫成文,徐茜,李蕊,張秀云,孔繁華;一種改進(jìn)的 HLA-B27 檢測(cè)方法[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1997年02期

4 周曄,劉海英,陳燕,鄧安梅,仲人前;原發(fā)性膽汁性肝硬化與人白細(xì)胞抗原相關(guān)性分析[J];中華消化雜志;2004年10期

5 張?zhí)祢?劉雨生;;可溶性人白細(xì)胞抗原G的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(計(jì)劃生育/生殖健康分冊(cè));2007年06期

6 海榮,畢力夫,蘇秀蘭;我國(guó)少數(shù)民族人白細(xì)胞抗原多態(tài)性研究概況[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年04期

7 王增慧;郭秋霞;趙綺華;何旦莎;鄧維意;;人白細(xì)胞抗原庫(kù)的建立[J];廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

8 程運(yùn)洪;;癌癥患者人白細(xì)胞抗原G檢測(cè)結(jié)果分析[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年17期

9 宋芳吉,陳耀華,蘇霄漢,劉子勇,李惠剛,徐沈玉,陳有余,范中來(lái);產(chǎn)后陰道血篩選HLA人白細(xì)胞抗原定型血清[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1979年02期

10 李少稚,馮江敏;乙肝病毒相關(guān)性腎炎與人白細(xì)胞抗原相關(guān)性的探討[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 赫東;陳倩;;先兆子癇患者人白細(xì)胞抗原-G的變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會(huì)暨第三次全國(guó)婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 戴良成;人白細(xì)胞抗原HLA-B*1502等位基因在南方人與北方人中分布頻率分析[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

本文編號(hào)：861963