本文關鍵詞：DANCE與細胞代謝模式改變的關系

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【摘要】：目的： 在細胞、mRNA、蛋白的水平上研究不同胞內密度細胞的代謝變化，進一步探討細胞代謝模式改變與DANCE（Density Alteration in Non-physiological Cells）的關系。 方法： 1. K562細胞分為對照組和0.1%VA（維甲酸）實驗組，37℃培養(yǎng)48h，進行非連續(xù)蔗糖密度梯度離心（Discontinuous Sucrose Gradient Centrifugation,DSGC），分離細胞各條帶。 2. Annexin V-PI雙染法檢測K562細胞中的S60、S50（正常組）、S50、S40（VA組）四條帶細胞的凋亡情況。 3.高通量測序檢測S50、S40（VA組）細胞中基因組mRNA的表達水平。 4.通過Real-time PCR、Western Blot檢測不同條帶K562細胞的mRNA和蛋白表達差異。 5.應用淋巴細胞分離液分離并制備糖尿病人外周血白細胞，再經DSGC分離得到S60、S50兩條帶白細胞。 6. PCR和Western Blot檢測不同條帶白細胞（糖尿�。┑膍RNA和蛋白表達差異。 結果： 1.對照組K562細胞經DSGC分離得到S60和S50兩條帶，0.1%VA處理的實驗組則分離得到S50和S40兩條帶。 2.對照組的S60和S50以及VA實驗組的S50和S40四條帶的細胞經流式分析發(fā)現，細胞壞死的比例依次增加，，以實驗組S40條帶細胞的最高。 3. VA實驗組S50與S40兩條帶細胞的基因表達譜具有顯著性差異。與S50相比，S40的細胞有62個基因的mRNA表達顯著上調，另有19個基因的mRNA表達顯著下調。 4. Real-time PCR和Western Blot檢測部分與細胞凋亡和DNA修復相關基因的mRNA和蛋白水平，我們發(fā)現VA實驗組的S50與S40兩條帶細胞的mRNA及蛋白水平具有顯著差異，該結果與高通量基因表達譜分析的結果一致。 5. DSGC分離糖尿病人外周血白細胞得到的S60和S50兩條帶細胞經PCR和Western Blot分析，發(fā)現炎癥相關因子CD36和IL-6兩個基因的表達水平具有顯著差異，CD36在S50白細胞中的水平顯著高于S60細胞，但IL-6在S60白細胞中的水平則顯著高于S50細胞。 結論： K562細胞和糖尿病人外周血白細胞的DANCE反應伴隨著細胞中基因表達譜的改變，提示細胞的DANCE反應與細胞的代謝改變密切相關。
【關鍵詞】：DANCE DSGC K562 白細胞 基因表達譜
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 緒論9-16
• 實驗材料與方法16-31
• 1 細胞株16
• 2 試劑及耗材16-17
• 3 儀器17-18
• 4 試劑配制18-21
• 5 引物序列21-22
• 6 實驗方法22-31
• 6.1 K562 細胞復蘇與培養(yǎng)22
• 6.2 K562 細胞的 DSGC 分離22-23
• 6.3 Annexin V/PI 雙染檢測各條帶 K562 細胞凋亡情況23
• 6.4 高通量測序檢測 K562 細胞 S50、S40（VA 組）細胞中各基因的 mRNA 表達水平23-24
• 6.5 Real-time PCR 檢測 S50、S40（VA 組）兩類 K562 細胞樣品中 AIMP2、APLF、WIPI1 的表達水平24-26
• 6.6 Western Blot 檢測 S60、S50（正常組），S50、S40（VA 組）四類 K562 細胞樣品中 AIMP2、APLF、WIPI1 的表達水平26-27
• 6.7 人外周血白細胞的分離27-28
• 6.8 人外周血白細胞的 DSGC 分離28
• 6.9 PCR 檢測 S60、S50 兩類白細胞樣品中 CD36 和 IL-6 的表達水平28-29
• 6.10 Western Blot 檢測 S60、S50 兩類白細胞樣品中 CD36 和 IL-6 表達水平29-30
• 6.11 統(tǒng)計學處理30-31
• 實驗結果與分析31-43
• 1 K562 細胞的 DSGC 分離31-32
• 1.1 K562 細胞 DSGC 分離結果31
• 1.2 K562 細胞 DSGC 分離結果分析31-32
• 2 K562 細胞 S50、S60（正常組），S40、S50（VA 組）條帶細胞凋亡測定32-33
• 2.1 K562 細胞流式結果32-33
• 2.2 K562 細胞流式結果分析33
• 3 高通量測序檢測 S40、S50（VA 組）細胞中各基因的 mRNA 表達水平33-38
• 3.1 K562 細胞高通量測序結果33-35
• 3.2 VA 處理的 K562 細胞 S40 和 S50 條帶代謝差異分析35-38
• 4 Real-time PCR、Western Blot 檢測 S50 與 S40（VA 組）部分基因與蛋白38-40
• 4.1 K562 細胞 Real-time PCR 檢測結果38
• 4.2 K562 細胞 Real-time PCR 檢測結果分析38-39
• 4.3 K562 細胞 Western Blot 檢測結果39
• 4.4 K562 細胞 Western Blot 檢測結果分析39-40
• 5 RT-PCR、Western Blot 檢測不同條帶白細胞的 mRNA 和蛋白表達差異40-43
• 5.1 人外周血白細胞 DSGC 分離結果40-41
• 5.2 人外周血白細胞 RT-PCR 檢測結果41
• 5.3 人外周血白細胞 Western Blot 檢測結果41
• 5.4 人外周血白細胞實驗結果分析41-43
• 討論43-46
• 全文結論46-47
• 不足與展望47-48
• 參考文獻48-51
• 英文縮略詞（Abbreviation）51-52
• 致謝52

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前7條

1 楊瑞華,海春旭,李瑞珍,吳端宗;過氧化氫與細胞生長狀態(tài)的劑量反應關系研究[J];癌變.畸變.突變;1997年02期

2 張勇;常淑芳;孫江川;王志剛;;過氧化氫聯合低頻超聲波誘導卵巢癌A2780/DDP細胞凋亡的研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2012年04期

3 謝曉東,李小民,蔣芹,劉淑華;梯度離心法在腫瘤藥物敏感性試驗中的應用研究[J];淮海醫(yī)藥;2002年02期

4 付政祺;楊瑩;田青;;蔗糖梯度離心技術方法在提取內質網的應用[J];醫(yī)學理論與實踐;2011年17期

5 劉瑞,馬愛群,郝春媛,劉進軍,高廣道;單核細胞與內皮細胞的相互作用對單核細胞CD36表達的影響[J];中國病理生理雜志;2004年03期

6 陳侃,陳東義,劉宏旭;亞硒酸鈉、維甲酸對肺癌細胞濃度效應關系的比較[J];中國醫(yī)科大學學報;2005年03期

7 張睿,王雪皎,王秀琴,郭明洲,丁芳,劉芝華,吳e

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