發(fā)布時(shí)間：2017-09-16 05:14

  本文關(guān)鍵詞：DANCE與細(xì)胞代謝模式改變的關(guān)系

  更多相關(guān)文章： DANCE DSGC K562 白細(xì)胞 基因表達(dá)譜

【摘要】：目的： 在細(xì)胞、mRNA、蛋白的水平上研究不同胞內(nèi)密度細(xì)胞的代謝變化，進(jìn)一步探討細(xì)胞代謝模式改變與DANCE（Density Alteration in Non-physiological Cells）的關(guān)系。 方法： 1. K562細(xì)胞分為對(duì)照組和0.1%VA（維甲酸）實(shí)驗(yàn)組，37℃培養(yǎng)48h，進(jìn)行非連續(xù)蔗糖密度梯度離心（Discontinuous Sucrose Gradient Centrifugation,DSGC），分離細(xì)胞各條帶。 2. Annexin V-PI雙染法檢測(cè)K562細(xì)胞中的S60、S50（正常組）、S50、S40（VA組）四條帶細(xì)胞的凋亡情況。 3.高通量測(cè)序檢測(cè)S50、S40（VA組）細(xì)胞中基因組mRNA的表達(dá)水平。 4.通過(guò)Real-time PCR、Western Blot檢測(cè)不同條帶K562細(xì)胞的mRNA和蛋白表達(dá)差異。 5.應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液分離并制備糖尿病人外周血白細(xì)胞，再經(jīng)DSGC分離得到S60、S50兩條帶白細(xì)胞。 6. PCR和Western Blot檢測(cè)不同條帶白細(xì)胞（糖尿�。┑膍RNA和蛋白表達(dá)差異。 結(jié)果： 1.對(duì)照組K562細(xì)胞經(jīng)DSGC分離得到S60和S50兩條帶，0.1%VA處理的實(shí)驗(yàn)組則分離得到S50和S40兩條帶。 2.對(duì)照組的S60和S50以及VA實(shí)驗(yàn)組的S50和S40四條帶的細(xì)胞經(jīng)流式分析發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞壞死的比例依次增加，，以實(shí)驗(yàn)組S40條帶細(xì)胞的最高。 3. VA實(shí)驗(yàn)組S50與S40兩條帶細(xì)胞的基因表達(dá)譜具有顯著性差異。與S50相比，S40的細(xì)胞有62個(gè)基因的mRNA表達(dá)顯著上調(diào)，另有19個(gè)基因的mRNA表達(dá)顯著下調(diào)。 4. Real-time PCR和Western Blot檢測(cè)部分與細(xì)胞凋亡和DNA修復(fù)相關(guān)基因的mRNA和蛋白水平，我們發(fā)現(xiàn)VA實(shí)驗(yàn)組的S50與S40兩條帶細(xì)胞的mRNA及蛋白水平具有顯著差異，該結(jié)果與高通量基因表達(dá)譜分析的結(jié)果一致。 5. DSGC分離糖尿病人外周血白細(xì)胞得到的S60和S50兩條帶細(xì)胞經(jīng)PCR和Western Blot分析，發(fā)現(xiàn)炎癥相關(guān)因子CD36和IL-6兩個(gè)基因的表達(dá)水平具有顯著差異，CD36在S50白細(xì)胞中的水平顯著高于S60細(xì)胞，但I(xiàn)L-6在S60白細(xì)胞中的水平則顯著高于S50細(xì)胞。 結(jié)論： K562細(xì)胞和糖尿病人外周血白細(xì)胞的DANCE反應(yīng)伴隨著細(xì)胞中基因表達(dá)譜的改變，提示細(xì)胞的DANCE反應(yīng)與細(xì)胞的代謝改變密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：DANCE DSGC K562 白細(xì)胞 基因表達(dá)譜
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目錄7-9
• 緒論9-16
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法16-31
• 1 細(xì)胞株16
• 2 試劑及耗材16-17
• 3 儀器17-18
• 4 試劑配制18-21
• 5 引物序列21-22
• 6 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 6.1 K562 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)22
• 6.2 K562 細(xì)胞的 DSGC 分離22-23
• 6.3 Annexin V/PI 雙染檢測(cè)各條帶 K562 細(xì)胞凋亡情況23
• 6.4 高通量測(cè)序檢測(cè) K562 細(xì)胞 S50、S40（VA 組）細(xì)胞中各基因的 mRNA 表達(dá)水平23-24
• 6.5 Real-time PCR 檢測(cè) S50、S40（VA 組）兩類 K562 細(xì)胞樣品中 AIMP2、APLF、WIPI1 的表達(dá)水平24-26
• 6.6 Western Blot 檢測(cè) S60、S50（正常組），S50、S40（VA 組）四類 K562 細(xì)胞樣品中 AIMP2、APLF、WIPI1 的表達(dá)水平26-27
• 6.7 人外周血白細(xì)胞的分離27-28
• 6.8 人外周血白細(xì)胞的 DSGC 分離28
• 6.9 PCR 檢測(cè) S60、S50 兩類白細(xì)胞樣品中 CD36 和 IL-6 的表達(dá)水平28-29
• 6.10 Western Blot 檢測(cè) S60、S50 兩類白細(xì)胞樣品中 CD36 和 IL-6 表達(dá)水平29-30
• 6.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理30-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析31-43
• 1 K562 細(xì)胞的 DSGC 分離31-32
• 1.1 K562 細(xì)胞 DSGC 分離結(jié)果31
• 1.2 K562 細(xì)胞 DSGC 分離結(jié)果分析31-32
• 2 K562 細(xì)胞 S50、S60（正常組），S40、S50（VA 組）條帶細(xì)胞凋亡測(cè)定32-33
• 2.1 K562 細(xì)胞流式結(jié)果32-33
• 2.2 K562 細(xì)胞流式結(jié)果分析33
• 3 高通量測(cè)序檢測(cè) S40、S50（VA 組）細(xì)胞中各基因的 mRNA 表達(dá)水平33-38
• 3.1 K562 細(xì)胞高通量測(cè)序結(jié)果33-35
• 3.2 VA 處理的 K562 細(xì)胞 S40 和 S50 條帶代謝差異分析35-38
• 4 Real-time PCR、Western Blot 檢測(cè) S50 與 S40（VA 組）部分基因與蛋白38-40
• 4.1 K562 細(xì)胞 Real-time PCR 檢測(cè)結(jié)果38
• 4.2 K562 細(xì)胞 Real-time PCR 檢測(cè)結(jié)果分析38-39
• 4.3 K562 細(xì)胞 Western Blot 檢測(cè)結(jié)果39
• 4.4 K562 細(xì)胞 Western Blot 檢測(cè)結(jié)果分析39-40
• 5 RT-PCR、Western Blot 檢測(cè)不同條帶白細(xì)胞的 mRNA 和蛋白表達(dá)差異40-43
• 5.1 人外周血白細(xì)胞 DSGC 分離結(jié)果40-41
• 5.2 人外周血白細(xì)胞 RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果41
• 5.3 人外周血白細(xì)胞 Western Blot 檢測(cè)結(jié)果41
• 5.4 人外周血白細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析41-43
• 討論43-46
• 全文結(jié)論46-47
• 不足與展望47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 英文縮略詞（Abbreviation）51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

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本文編號(hào)：861075