本文關(guān)鍵詞：Exo70在大鼠血管平滑肌細(xì)胞中的定位與功能的初步研究

  更多相關(guān)文章： 動(dòng)脈粥樣硬化 血管平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞遷移 Exo70

【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是當(dāng)今嚴(yán)重危害著人類(lèi)健康的進(jìn)行性疾病，其發(fā)病機(jī)理一直是研究熱點(diǎn)。在AS的發(fā)生過(guò)程中，來(lái)自?xún)?nèi)皮的血小板源性生長(zhǎng)因子（platelet-derived growth factorPDGF）會(huì)使中膜的血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cellVSMC）發(fā)生表型轉(zhuǎn)換，并從中膜向內(nèi)膜發(fā)生遷移，繼而發(fā)生泡沫化并參與粥樣斑塊的形成。 胞外分泌復(fù)合體(exocyst)是由8個(gè)蛋白質(zhì)亞基構(gòu)成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，廣泛存在于酵母、哺乳動(dòng)物和植物中，在細(xì)胞的胞外分泌過(guò)程中起主要作用。Exo70是exocyst中的關(guān)鍵亞基，在酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的胞外分泌過(guò)程中，Exo70主要參與介導(dǎo)運(yùn)輸囊泡與目的質(zhì)膜的錨定與融合過(guò)程。此外，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，Exo70還參與細(xì)胞遷移、細(xì)胞連接構(gòu)建等多種重要的生理過(guò)程。 本實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系A(chǔ)7r5和大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)免疫熒光染色，RT-PCR和冰凍切片等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，對(duì)Exo70在大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系A(chǔ)7r5細(xì)胞中的表達(dá)，定位情況，遷移過(guò)程中的定位情況，以及大鼠高脂飲食誘導(dǎo)的AS發(fā)生過(guò)程中Exo70的表達(dá)進(jìn)行了研究，旨在明確Exo70在VSMC中的表達(dá)特性及其在VSMC遷移過(guò)程中的作用，力求找到AS發(fā)生過(guò)程中新的參與因素，從而為動(dòng)脈粥樣硬化提供新的治療靶點(diǎn)。 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1、Exo70在大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系A(chǔ)7r5中的表達(dá) 鑒于文獻(xiàn)尚無(wú)Exo70在主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中表達(dá)情況的相關(guān)報(bào)道，因此論文首先對(duì)Exo70在A7r5細(xì)胞系中的表達(dá)情況進(jìn)行了研究。RT-PCR結(jié)果顯示，Exo70在mRNA水平上確有表達(dá)。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果也表明Exo70在A7r5細(xì)胞中有表達(dá)，主要分布于細(xì)胞質(zhì)中。 2、Exo70在大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系A(chǔ)7r5中的定位 在確定了Exo70在A7r5細(xì)胞中確有表達(dá)后，論文利用免疫熒光標(biāo)記對(duì)Exo70在A7r5中的定位進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示Exo70與Actin有明顯的共定位現(xiàn)象，但與Tublin的共定位現(xiàn)象不明顯。細(xì)胞松弛素B處理細(xì)胞后，胞內(nèi)Actin聚合狀態(tài)發(fā)生變化，此時(shí)Exo70在胞質(zhì)內(nèi)呈彌散分布，這說(shuō)明Exo70在發(fā)揮功能時(shí)可能是依賴(lài)微絲實(shí)現(xiàn)的。 3、Exo70在大鼠主動(dòng)脈平滑肌A7r5細(xì)胞遷移過(guò)程中的定位 論文利用免疫熒光標(biāo)記研究了在A7r5劃傷愈合的遷移過(guò)程中Exo70的定位情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在A7r5劃傷遷移細(xì)胞的邊緣，存在Actin的聚集，而在此處Exo70與Actin存在明顯的共定位。這說(shuō)明，Exo70參與了A7r5細(xì)胞的遷移過(guò)程。 4、Exo70在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)變化 為了進(jìn)一步明確Exo70在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生中的表達(dá)變化情況，論文首先構(gòu)建了高脂飲食誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型，利用組織免疫熒光技術(shù)觀察了病變區(qū)域Exo70的表達(dá)情況。結(jié)果表明，Exo70在大鼠主動(dòng)脈平滑肌中也有表達(dá)，且表達(dá)量隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的加重增加。在斑塊部位，Exo70的表達(dá)水平較正常血管組織中有顯著增加。 基于本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，我們認(rèn)為，Exo70參與了主動(dòng)脈平滑肌的遷移及動(dòng)脈粥樣斑塊的形成過(guò)程。AS是多因素參與的復(fù)雜病變過(guò)程，VSMC的遷移及泡沫化在斑塊形成的過(guò)程中具有重要作用，我們推測(cè)，在VSMC遷移過(guò)程中，Exo70通過(guò)與Actin相互作用，參與了微絲骨架的重組以及偽足的行成，并由此影響AS斑塊形成進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：動(dòng)脈粥樣硬化 血管平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞遷移 Exo70
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5;R-332
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 綜述12-26
• 1. 血管平滑肌細(xì)胞12-18
• 1.1 血管的結(jié)構(gòu)12
• 1.2 動(dòng)脈粥樣硬化12-14
• 1.3 血管平滑肌細(xì)胞14-18
• 1.3.1 VSMC 表型轉(zhuǎn)換14-15
• 1.3.2 VSMC 的增殖15-16
• 1.3.3 VSMC 遷移16-18
• 2. Exo7018-26
• 2.1 exocyst 的發(fā)現(xiàn)18-19
• 2.2 Exo70 的結(jié)構(gòu)19-22
• 2.3 Exo70 的亞細(xì)胞定位及其與細(xì)胞骨架的相互作用22-23
• 2.4 Exo70 的功能23-26
• 實(shí)驗(yàn)部分26-55
• 第一章 Exo70 在大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系 A7r5 中的表達(dá)26-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-32
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 1.4 討論33-35
• 第二章 Exo70 在大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系 A7r5 中的定位35-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-38
• 2.4 討論38-40
• 第三章 Exo70 在大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系 A7r5 遷移過(guò)程中的定位40-45
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料40
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-43
• 3.4 討論43-45
• 第四章 Exo70 在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)變化45-55
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法46-48
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-52
• 4.4 討論52-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章63-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 吳越陽(yáng);鐵璐;李學(xué)軍;;細(xì)胞骨架蛋白調(diào)節(jié)囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)及其與神經(jīng)疾病的關(guān)系[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2010年01期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李莉;SIRT1在血管平滑肌細(xì)胞增殖和新生內(nèi)膜形成中的作用及分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

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本文編號(hào)：860161