本文關(guān)鍵詞：miR-24抑制低溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 心肌細(xì)胞 低溫誘導(dǎo) 凋亡 miR-24 Bim caspase-3

【摘要】：目的： 研究25°C低溫環(huán)境能否誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，探討miR-24能否抑制低溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及其可能的機(jī)制。 方法： 以H9C2心肌樣細(xì)胞為研究對(duì)象，（1）將H9C2心肌細(xì)胞置于25°C低溫培養(yǎng)箱中分別處理4h、8h、16h、24h、32h、40h、48h，以正常組細(xì)胞作為對(duì)照，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況，western blot檢測(cè)各種細(xì)胞中caspase-3及Bim蛋白表達(dá)情況，熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-24的表達(dá)情況；并據(jù)凋亡情況選擇24h作為下一步轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的低溫處理時(shí)間；（2）采用Lipofectarmine-2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染，將人工化學(xué)合成的miR-24mimic及miR-24inhibitor轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染是否成功，采用qRT-PCR檢測(cè)miR-24的表達(dá)情況判斷轉(zhuǎn)染效率；（3）經(jīng)轉(zhuǎn)染的心肌細(xì)胞并經(jīng)低溫處理24h后，同樣用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡情況，westernblot檢測(cè)各種細(xì)胞中caspase-3及Bim蛋白表達(dá)情況，，熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-24的表達(dá)情況。 結(jié)果： （1）心肌細(xì)胞經(jīng)低溫處理4h、8h、16h、24h、32h、40h、48h后，與正常對(duì)照組相比細(xì)胞凋亡率逐漸升高，在24小時(shí)達(dá)到高峰（P＜0.05）；細(xì)胞凋亡的標(biāo)記性蛋白caspase-3的表達(dá)也逐漸增加，在24小時(shí)達(dá)到高峰（P＜0.005）；miR-24的表達(dá)逐漸下降，在24小時(shí)達(dá)低峰（P＜0.01）；Bim蛋白的表達(dá)從16小時(shí)（即當(dāng)miR-24的水平顯著下降）開(kāi)始逐漸升高，在24小時(shí)達(dá)高峰（P＜0.005）； （2）轉(zhuǎn)染濃度為100nM時(shí)，miR-24mimic使miR-24的表達(dá)上調(diào)8倍，miR-24inhibitor使miR-24的表達(dá)下調(diào)79%（P＜0.005）； （3）與低溫對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染miR-24mimic組細(xì)胞經(jīng)低溫處理后凋亡明顯減少（P＜0.01），caspase-3蛋白表達(dá)減少（P＜0.05），Bim的表達(dá)明顯下降（P＜0.05）；而轉(zhuǎn)染miR-24inhibitor組細(xì)胞經(jīng)低溫處理后凋亡明顯增加，caspase-3蛋白表達(dá)增加，Bim的表達(dá)明顯增加。 結(jié)論： 25°低溫可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，miR-24能抑制低溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與抑制促凋亡蛋白Bim的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：心肌細(xì)胞 低溫誘導(dǎo) 凋亡 miR-24 Bim caspase-3
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-16
• 2.1.1 試驗(yàn)細(xì)胞13
• 2.1.2 主要試劑13-14
• 2.1.3 試劑配制14-15
• 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-19
• 2.2.2 細(xì)胞冷應(yīng)激模型建立19-20
• 2.2.3 細(xì)胞總蛋白提取20
• 2.2.4 細(xì)胞總 RNA 提取20-21
• 2.2.5 蛋白定量與質(zhì)量鑒定21
• 2.2.6 RNA 定量與質(zhì)量鑒定21-22
• 2.2.7 Annexin V/PI 雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡22
• 2.2.8 qRT-PCR 法檢測(cè)各組細(xì)胞中 miR-24 的表達(dá)22-24
• 2.2.9 Western Blot 檢測(cè) Bim 及 caspase-3 蛋白表達(dá)24
• 2.2.10 miRNA 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25-26
• 第3章 結(jié)果26-36
• 3.1 低溫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡26-29
• 3.1.1 鏡下正常 H9C2 細(xì)胞形態(tài)鑒定26
• 3.1.2 低溫誘導(dǎo) H9C2 細(xì)胞凋亡26-28
• 3.1.3 低溫刺激對(duì)凋亡標(biāo)記性蛋白 caspase-3 表達(dá)的影響28-29
• 3.2 低溫刺激對(duì) Bim 蛋白及 miR-24 表達(dá)的影響29-32
• 3.2.1 低溫刺激對(duì) Bim 蛋白表達(dá)的影響29
• 3.2.2 低溫刺激對(duì) miR-24 表達(dá)的影響29-32
• 3.3 miR-24 抑制低溫誘導(dǎo)的 H9C2 凋亡32-36
• 3.3.1 miR-24 轉(zhuǎn)染效率的確定32-33
• 3.3.2 轉(zhuǎn)染并低溫處理后 miR-24 的表達(dá)33-34
• 3.3.3 轉(zhuǎn)染后低溫誘導(dǎo) H9C2 細(xì)胞凋亡情況34-35
• 3.3.4 轉(zhuǎn)染后低溫處理與 Bim 及 caspase-3 蛋白表達(dá)35-36
• 第4章 討論36-39
• 4.1 低溫誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡36
• 4.2 miR-24 與 Bim 共同參與低溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡36-37
• 4.3 miR-24 抑制低溫誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡37-38
• 4.4 實(shí)驗(yàn)思路和方法完善38-39
• 第5章 結(jié)論39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)54-56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 鮑曉明;程曉曙;黃曉;王耀晟;李菊香;洪葵;;低溫致乳鼠心肌細(xì)胞損傷中Bim蛋白的作用及PI3K/Akt相關(guān)機(jī)制[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年24期

2 宋學(xué)立,錢(qián)令嘉,李風(fēng)芝;冷應(yīng)激對(duì)心肌細(xì)胞損傷的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

本文編號(hào)：840461